人脑钠肽的中和性基因工程抗体3C1及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种人源化抗人脑钠肽中和性基因工程抗体3C1制备方法，包括：将噬菌体粒基因3C1用NocI和NotI双酶切后插入到pET22b质粒构建成重组质粒pET22b‑3C1；转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS得到基因工程菌pET22b‑3C1/BL21(DE3)pLysS；经异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达、纯化，复性后得到重组目的蛋白3C1。本发明还公开了人脑钠肽的中和性基因工程抗体3C1在制备脑性盐耗综合征等颅脑疾病的药物中的应用。本发明人脑钠肽的中和性基因工程抗体3C1的制备方法具有快速、成本低、人源化等优点，且适合工业化生产。

主权项

一种人脑钠肽的中和性基因工程抗体3C1的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a)将特异性识别脑钠肽的噬菌体粒基因3C1用Noc I和Not I双酶切后插入到pET22b质粒中，构建成重组质粒pET22b‑3C1；将所述重组质粒pET22b‑3C1转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，得到基因工程菌pET22b‑3C1/BL21(DE3)pLysS；b)将所述基因工程菌pET22b‑3C1/BL21(DE3)pLysS涂板，挑取单克隆菌至2YT培养基中，37℃培养过夜，按1:100比例转接后继续培养至OD_600nm≈0.4，加1mM异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷诱导4个小时；离心收集菌体，超声破菌，获得包涵体后洗涤、溶解，取上清过Ni‑NTA亲和柱，纯化产物进行复性处理，获得重组目的蛋白3C1；其中，所述人脑钠肽的中和性基因工程抗体3C1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，步骤a)中基因3C1的脱氧核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。