检测苹果锈果类病毒的NASBA引物、试剂盒和方法

摘要

本发明公开了一种检测苹果锈果类病毒的NASBA引物、试剂盒和方法，上游引物、下游引物的序列分别为SEQ ID NO:1～2；NASBA扩增试剂盒，包括如下组分：（1）NASBA扩增反应液A；（2）NASBA扩增反应液B；检测方法如下：1）样品RNA的提取；2）进行ASSVd的NASBA扩增；3）电泳检测。本发明适用于对苹果锈果类病毒进行快速检测确证，可广泛应用于农业生产及环境中的疫情监控及进出口贸易中该类病毒的监测及检测，操作极为简便，所需样品量小且对于模板RNA的质量要求较低。

主权项

检测苹果锈果类病毒的NASBA扩增试剂盒，包括如下组分：（1）NASBA扩增反应液A:每25μL包括10×AMV buffer 2.5μL，6.25mmol /L NTPs 3μL，10 mmol /L dNTPs 1.5μL，10μmol /L上游引物NA‑P1、下游引物NA‑P2各0.5μL，双蒸水9μL；其中缓冲液为含40 mmol /L pH 8.5 Tris‑HCl，70 mmol /L KCl，12 mmol /L MgCl₂，5 mmol /L DTT缓冲液；（2）NASBA扩增反应液B:0.5 U RNaseH，32 U T7RNA 聚合酶，6.4 U AMV 反转录酶，2μL DMSO，0.1μL 1 mol /L 二硫苏糖醇，0.25μL 10 mg /mL BSA，20 U RNA 酶抑制剂；引物NA‑P1、NA‑P2的序列分别为 SEQ ID NO:1～2。