一种单子叶植物的组织培养方法

摘要

本发明公开了一种单子叶植物的组织培养方法。该方法涉及一种包括如下步骤的获得单子叶植物II型愈伤组织的方法：1）以单子叶植物的成熟种子为外植体，接种于愈伤组织诱导培养基上，25±2℃避光诱导培养4‑6周，获得愈伤组织1；2）从步骤1）获得的愈伤组织1剥去最外层的白色愈伤组织，取内部黄色的胚性愈伤组织，接种于愈伤组织继代培养基上，25±2℃避光培养3周，获得愈伤组织2；3）从步骤2）获得的愈伤组织2中选取在继代培养的3周时间内体积增大60%以上的愈伤组织；即为II型愈伤组织。实验证明，本发明适用于不同生态型的枝稷，且可在较短时间内获得再生效率高的优良愈伤组织，节省时间及成本，加快柳枝稷基因改良的生物育种进程。

主权项

一种单子叶植物的组织培养方法，包括如下步骤：(1)以单子叶植物的成熟种子为外植体，接种于愈伤组织诱导培养基上，25±2℃避光诱导培养4‑6周，获得愈伤组织1；(2)将步骤(1)获得的愈伤组织1剥去最外层的白色愈伤组织，取内部黄色的胚性愈伤组织，接种于愈伤组织继代培养基上，25±2℃避光条件下继代培养3周，获得愈伤组织2；(3)从步骤(2)获得的愈伤组织2中选取II型愈伤组织接种于分化培养基上，25±2℃光照培养4周，光照周期为16h/黑暗8h，光照强度为200μmol·m^‑2·s^‑1，获得再生芽；所述II型愈伤组织为在继代培养的3周时间内体积增大60％以上的愈伤组织；(4)将步骤(3)获得的再生芽接种生根培养基上，25±2℃生根培养2周，光照周期为16h/黑暗8h，光照强度为200μmol·m^‑2·s^‑1，获得再生苗；所述单子叶植物为柳枝稷；所述柳枝稷为低地型柳枝稷、过度型柳枝稷或高地型柳枝稷；所述低地型柳枝稷为柳枝稷品种Alamo或Performer；所述过度型柳枝稷为柳枝稷品种Carthage；所述高地形柳枝稷为柳枝稷品种Blackwell或Dacotah；所述愈伤组织诱导培养基为MB固体培养基或MS7固体培养基或NB7固体培养基；所述愈伤组织继代培养基为固体MP培养基；所述分化培养基为REG固体培养基；所述生根培养基为1/2MS固体培养基；所述MB固体培养基是在MS固体培养基中加入麦芽糖、2,4‑D和6‑BA后得到的培养基；所述MB固体培养基中麦芽糖的终浓度为30g/L、2,4‑D的终浓度为5mg/L、6‑BA的终浓度为1mg/L；所述MS7固体培养基是在MS固体培养基中加入麦芽糖和2,4‑D后得到的培养基；所述MS7固体培养基中麦芽糖的终浓度为30g/L、2,4‑D的终浓度为7mg/L；所述NB7固体培养基的溶剂为水，溶质及其浓度如下：硝酸钾2830mg/L，硫酸铵463mg/L，二水合氯化钙166mg/L，七水合硫酸镁185mg/L，磷酸二氢钾400mg/L，七水合硫酸亚铁27.8mg/L，四水合硫酸锰4.4mg/L，七水合硫酸锌1.5mg/L，硼酸1.6mg/L，碘化钾0.8mg/L，Na₂·EDTA·2H₂O 37.3mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1mg/L，盐酸吡哆醇1mg/L，盐酸硫胺素10mg/L，麦芽糖30g/L，水解酪蛋白500mg/L，脯氨酸500mg/L，2,4‑D 7mg/L，植物凝胶4.0g/L；所述MP固体培养基是在所述MB固体培养基中加入终浓度为2g/L的脯氨酸后得到的培养基；所述REG固体培养基是在MS固体培养基中加入NAA、GA、6‑BA和麦芽糖后得到的培养基；所述REG固体培养基中NAA的终浓度为0.2mg/L、GA的终浓度为0.5mg/L、6‑BA的终浓度为1mg/L、麦芽糖的终浓度为30g/L；所述1/2MS固体培养基为将MS固体培养基中的大量元素组分浓度减半其余组分浓度不变，再加入麦芽糖后得到的培养基；所述1/2MS固体培养基中麦芽糖的终浓度为30g/L。