西兰苔凝集素的制备方法与应用

摘要

本发明提供西兰苔凝集素的制备方法与应用，首先采用磷酸缓冲液浸提,硫酸铵沉淀,离心透析,再使用离子交换色谱Sephadex A‑52和凝胶色谱葡聚糖凝胶Sephadex G‑75柱分离纯化,得到纯化的西兰苔凝集素BL。本发明得到的西兰苔凝集素具有抗菌活性和抗肿瘤活性。癌细胞相比，西兰台凝集素对正常细胞的毒性小。因而，本发明得到的西兰苔凝集素有利于功能食品、医药和其它领域的开发利用。

主权项

西兰苔凝集素的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)将西兰苔洗净，切碎，冻干后粉碎，得到干粉，准确称取干粉10～100g，加入100～500ml缓冲液，置于冰箱中，过滤，滤液离心后收集上清液，将上清液在搅拌条件下加入硫酸铵晶体至饱和度为10％～90％，于冰箱中过夜，离心取沉淀，将沉淀加入蒸馏水溶解后，置于透析袋中进行透析，冷冻干燥，即为西兰苔凝集素粗品；所述缓冲液为磷酸缓冲液，pH＝6～9；所述离心的离心温度为4～8℃，转速为3000～10000r/min，离心时间10～60min；(2)称取步骤(1)得到的西兰苔凝集素粗品50～300mg，溶解于0.5～5ml，pH为6～9的Tris‑HCl缓冲液，用DEAE Sephadex A‑52离子交换层析，并用NaCl溶液梯度洗脱，调节流速为0.5ml/min，每管收集8min，收集具有凝血活性的第一个蛋白峰冻干保存，得到西兰苔凝集素样品；所述梯度洗脱为用浓度为0.1mol/L～1mol/L的NaCl溶液，洗脱5次；所述NaCl溶液的溶剂为Tris‑HCl缓冲液；所述Tris‑HCl缓冲液pH 6～9；(3)称取步骤(2)得到的西兰苔凝集素样品10～200mg溶于0.5～5ml pH为6～9的Tris‑HCl缓冲液中，再进行凝胶色谱葡聚糖凝胶Sephadex G‑75分离纯化，再用NaCl溶液梯度洗脱，调节流速为0.5ml/min，每管收集8min，收集具有凝血活性的第一个蛋白峰冻干保存，得到纯化的西兰苔凝集素BL；所述梯度洗脱为用浓度为1mol/L～3mol/L的NaCl溶液，洗脱5次；所述溶液溶剂为Tris‑HCl缓冲液；所述Tris‑HCl缓冲液pH 6～9；西兰苔凝集素BL分子量为27KDa，糖含量为7.6％，最小凝血浓度为4μg/ml，具有D‑甘露糖和阿拉伯糖结合位点。