用毕赤酵母分泌表达重组人蛋白质二硫键异构酶

摘要

用毕赤酵母分泌表达重组人蛋白二硫键异构酶本发明属生物技术领域，具体涉及一种重组人蛋白质二硫键异构酶(human protein disulphide isomerase，hPDI₄₉₁)及其制备方法和应用。本发明应用RT‑PCR方法，扩增得到人蛋白质二硫键异构酶(human protein disulphide isomerase，hPDI491)cDNA，与甲醇酵母(Pichia pastoris)表达载体pPICZα重组，获得表达质粒pPICZa‑hPDI，转化毕赤酵母菌X33，筛选出高效表达工程菌株。实现在甲醇酵母中以分泌形式大量表达重组人蛋白质二硫键异构酶。工程菌经发酵、诱导表达，分离纯化后，纯度90％以上。实验证明本发明产物具有在体外促进其它蛋白质正确折叠的作用。

主权项

一种制备有助于蛋白质折叠的分子伴侣，即重组人蛋白质二硫键异构酶的方法，所述重组人蛋白质二硫键异构酶的氨基酸序列是SEQ ID NO：2，其特征在于采取下列步骤：(1)以人蛋白质二硫键异构酶基因为模板，用RT‑PCR的方法克隆hPDI₄₉₁ cDNA基因，所述hPDI₄₉₁ cDNA基因编码如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；(2)hPDI₄₉₁ cDNA基因与表达载体重组；(3)用上述重组表达载体转化宿主细胞，使hPDI₄₉₁ cDNA基因与宿主染色体发生重组；(4)培养宿主细胞，从培养液中回收和纯化产物；(5)生物学方法鉴定重组人蛋白质二硫键异构酶；所述表达载体为pPICZα；所述宿主细胞为甲醇营养型毕赤酵母细胞。