发明名称 一种不依赖抗生素为选择压力的棒状杆菌表达系统
摘要 本发明公开了一种不依赖抗生素为选择压力的棒状杆菌表达系统,属于微生物基因工程领域。本发明通过构建alr敲除载体和用于质粒回补的表达载体,在方便实验室研究利用的同时,可实现发酵过程不再依赖抗生素。通过验证,本发明提供的表达系统在无抗生素添加条件下发酵时菌体内质粒稳定性;用于构建对支链氨基酸‑缬氨酸合成途径主要基因ilvBNC的过表达载体时,显著提高了其缬氨酸产量。本发明提供的棒状杆菌表达系统具有广泛的应用价值。
申请公布号 CN103834679B 申请公布日期 2016.08.17
申请号 CN201410057876.X 申请日期 2014.02.20
申请人 江南大学 发明人 王小元;胡瑾瑜;李颜颜;胡晓清;谭延镇
分类号 C12N15/77(2006.01)I;C12N1/20(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12P13/08(2006.01)I;C12R1/15(2006.01)N 主分类号 C12N15/77(2006.01)I
代理机构 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 代理人 何自刚;王玉松
主权项 一种应用棒状杆菌表达系统表达缬氨酸合成途径基因ilvBNC并发酵生产缬氨酸的方法,其特征在于,所述棒状芽孢杆菌表达系统通过质粒回补基因组alr基因缺陷,从而使表达载体在无抗生素添加情况下稳定存在于菌体中并行使表达功能;所述表达系统包括alr基因缺陷型表达宿主和核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的表达载体;所述方法主要步骤为:(1)扩增ilvBNC基因片段,在两端分别引入NotI及HpaI酶切位点;将PCR产物片段以相应限制酶酶切后连入以同样限制酶酶切的表达载体,得到重组表达质粒;(2)将重组表达质粒转入通过alr敲除载体敲除了alr基因的棒状杆菌,发酵产缬氨酸。
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