细胞体外收集方法及其应用、体外细胞材料及其应用

摘要

本发明公开了一种细胞收集方法、细胞材料。针对现有Transwell迁移研究对实验结果提示的科学内容利用有限的缺陷，本发明首先提供了一种细胞体外收集方法。本方法在Transwell细胞迁移培养结束并去除Transwell上室、下室内培养液后，采用胰酶消化并结合机械振荡的方法分别对Transwell细胞迁移实验后上室、下室中的细胞进行消化、收集；胰酶细胞消化操作中，洗涤液为pH 7.35～7.45磷酸盐缓冲液，胰酶细胞消化液含0.25％胰酶和0.01％EDTA。本发明同时提供一种包括由相同趋化因子诱导下分离产生的高迁移性活细胞材料与低迁移活性细胞材料。本发明还提供上述收集方法与细胞材料在细胞生物学行为分析试验中的应用。本发明能够使Transwell体外迁移实验拓展到细胞迁移的细胞生物学行为与分子生物学研究。

主权项

一种细胞体外收集方法，其特征在于：应用于Transwell细胞迁移实验，依如下步骤实施：步骤S1、初次洗涤Transwell细胞迁移培养结束并去除Transwell上室、下室内培养液后，在上室、下室中分别加入pH 7.35～7.45磷酸盐缓冲液洗涤培养室，收集上室与下室中洗涤液分别存入二离心管中，分别标记为离心管A、离心管B；步骤S2、消化收集向Transwell上室、下室中分别加入胰酶细胞消化液，胰酶细胞消化液加入量为分别覆盖Transwell上室与下室底部，所述胰酶细胞消化液含0.25％胰酶和0.01％EDTA，待细胞分散悬浮，分别收集上室、下室中消化液对应加入离心管A、离心管B中，分别向离心管A、离心管B中加入100％牛血清终止细胞消化，加入量是胰酶细胞消化液加入量的10％～20％；步骤S3、再次洗涤收集分别向Transwell上室、下室中加入pH 7.35～7.45磷酸盐缓冲液，将Transwell培养室水平振荡，水平振荡培养条件100r/min～150r/min、时间5min，分别收集上室、下室中洗涤液对应加入离心管A、离心管B中；步骤S4、离心收集细胞将离心管A、离心管B离心，去除上清液，分别向离心管A、离心管B中加入pH 7.35～7.45磷酸盐缓冲液，重悬并收集离心管底部细胞团块，得收集细胞。