一种猪FTO基因编码区A227G单碱基突变的检测方法及应用

摘要

本发明涉及一种猪FTO基因A227G碱基突变的检测方法及应用，属基因工程技术领域。根据GenBank数据库猪FTO基因序列设计特异性引物，对待检测猪基因组进行PCR扩增；分离、纯化扩增产物，获得特异核酸；使用限制性内切酶 HhaI，对PCR扩增产物进行RFLP（酶切）分析，根据酶切后PCR产物的琼脂糖电泳条带，判断待检猪是否存在A227G单核苷酸碱基突变。且该突变中的A等位基因可应用于猪育种生产中，为提高猪产仔数的有利等位基因。本发明对提高猪产仔数的分子育种提供依据，同时为猪的早期胚胎丢失机理研究提供基因工程技术帮助。

主权项

一种猪FTO基因编码区A227G单碱基突变的非诊断的检测方法，其特征在于如下步骤：1)据GenBank数据库猪FTO基因序列设计特异引物：正义引物5’‑TACCCTAAGCTAATTCTCCGA‑3’反义引物5’‑GAGATACTGGCGTGAGCAAA‑3’应用上述引物对待检测猪基因组进行PCR扩增，PCR扩增产物长度152bp；2)使用限制性内切酶HhaI，对PCR扩增产物进行RFLP酶切分析，酶切位点如下，5'...G C G︱C...3'，3'...C︱G C G...5'：序列中的“︱”为酶切位置使用HhaI内切酶对上述152bp的PCR产物进行RFLP酶切分析，根据酶切后PCR产物的琼脂糖电泳条带的条数和大小，判断待检猪FTO基因A227G单核苷酸碱基突变的基因型:只有一条152bp条带的为AA基因型,为无突变型；有152bp和78bp两条条带的为AG基因型,为突变杂合型；只有一条78bp条带的为GG基因型,为完全突变型。