一种检测水中大肠杆菌的微流控芯片以及方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，公开了一种检测水中大肠杆菌的微流控芯片以及方法。本发明所述微流控芯片包括偶联有大肠杆菌抗体的磁性微球、异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌抗体以及芯片盒，还可以包括梯度浓度的大肠杆菌菌悬液、磷酸缓冲液和吐温组成的洗涤液及磁铁。本发明基于免疫磁珠技术对水中大肠杆菌进行了准确、简便的含量检测，检测周期短，程序简单易操作，能够适应污染源快速诊断的需要。

主权项

一种检测水中大肠杆菌的微流控芯片，其特征在于，包括：偶联有大肠杆菌抗体的磁性微球、异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌抗体、芯片盒、梯度浓度的大肠杆菌菌悬液、磷酸缓冲液和吐温组成的洗涤液及磁铁；所述芯片盒由下部基片和上部盖板组成，其内刻有检测反应主通道以及和检测反应主通道相连接的添加试剂的分通道，所述检测反应主通道和添加试剂的分通道均设有可开关的开口；所述洗涤液由0.05mol/L磷酸缓冲液和体积百分比为0.05％的吐温组成，pH为7.2；所述大肠杆菌为E.coli O157:H7；所述偶联有大肠杆菌抗体的磁性微球浓度0.8mg/ml；所述异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌抗体浓度50μg/ml；所述微流控芯片采用如下方法对水中的大肠杆菌进行检测：步骤1、在芯片盒上设置磁铁，所述芯片盒由下部基片和上部盖板组成，其内刻有检测反应主通道以及和检测反应主通道相连接的添加试剂的分通道，所述检测反应主通道和添加试剂的分通道均设有可开关的开口；步骤2、将偶联有大肠杆菌抗体的磁性微球通过添加试剂的分通道泵入到检测反应主通道，通过磁铁将偶联有大肠杆菌抗体的磁性微球固定于微流控芯片主通道内，然后将已知浓度的大肠杆菌菌悬液也通过添加试剂的分通道泵入到检测反应主通道；步骤3、488nm激发光照射检测反应主通道，检测525nm荧光强度，获得荧光强度值F1；步骤4、将异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌抗体通过添加试剂的分通道泵入到检测反应主通道，通过添加试剂的分通道泵入磷酸缓冲液和吐温组成的洗涤液冲洗整个检测反应主通并排出，直至525nm荧光强度稳定，获得荧光强度值F2，计算获得检测荧光强度值F＝F2‑F1；步骤5、断电消除磁铁磁性，解除磁性微球的固定，再次泵入磷酸缓冲液和吐温组成的洗涤液冲洗整个检测反应主通并排出，直至525nm荧光强度接近空白值；步骤6、按照步骤1‑步骤5的方法，用梯度浓度的大肠杆菌菌悬液分别获得多个荧光强度值F，然后获得不同浓度大肠杆菌菌悬液的浓度对数值与对应检测荧光强度的标准曲线；步骤7、将待测水样按照步骤1‑步骤5的方法获得检测荧光强度值，代入到步骤6得到的标准曲线中获得水中大肠杆菌的浓度。