一种恢复间充质干细胞全能性的方法

摘要

本发明公开了一种恢复间充质干细细胞全能性的培养方法。本发明提供了一种恢复间充质干细细胞全能性的方法，包括如下步骤：1）将全能性降低的离体间充质干细胞悬滴培养，得到悬滴培养后的细胞；2）将所述悬滴培养后的细胞继续悬浮培养，实现恢复间充质干细细胞全能性。本发明的实验证明，本发明提供了一种恢复间充质干细胞全能性的方法，具体采用3D培养，将经过多次传代培养的间充质干细胞（全能性降低的离体间充质干细胞）经3D培养处理后，其增大的体积逐渐恢复、细胞活性增强、克隆能力和分化能力增强、其旁分泌作用也有所提高，使已经衰老的间充质干细胞重返年轻，恢复了干细胞特性。

主权项

一种恢复间充质干细细胞全能性的方法，包括如下步骤：1)将全能性降低的离体间充质干细胞悬滴培养，得到悬滴培养后的细胞；2)将所述悬滴培养后的细胞继续悬浮培养，实现恢复所述全能性降低的离体间充质干细胞全能性；步骤1)中，所述全能性降低的离体间充质干细胞为将离体间充质干细胞经体外扩增得到的间充质干细胞；所述体外扩增培养为传代培养4‑10代；所述传代培养采用贴壁培养的方式；所述恢复所述全能性降低的离体间充质干细胞全能性体现在减小所述全能性降低的离体间充质干细胞的体积、降低所述全能性降低的离体间充质干细胞S期的细胞数量、增强所述全能性降低的离体间充质干细胞的分化能力、增强所述全能性降低的离体间充质干细胞的克隆能力和/或提高所述全能性降低的离体间充质干细胞中与全能性相关基因表达；所述与全能性相关基因为CCR1、CCR2、CX3CR、CD49b、CXCR4、OCT4、SOX2和/或NANONG；步骤1)中，所述悬滴培养包括如下步骤：将所述全能性降低的离体间充质干细胞悬浮，得到细胞悬液；再将所述细胞悬液滴加在培养皿盖上，再将滴加后的盖倒置在培养皿底上，培养，得到悬滴即为悬滴培养后的细胞；所述细胞悬液的浓度为10⁴‑10⁸个/mL；所述悬滴培养还包括如下步骤：在所述培养前，向所述培养皿底中加入防止悬滴干燥的水或溶液；所述溶液为浓度为0.01M、pH值为7.4的PBS缓冲液、生理盐水、细胞培养液或其它缓冲液；所述培养皿为细胞或细菌培养皿；所述细胞或细菌培养皿的材质为塑料或玻璃；所述悬滴培养中悬浮采用的悬浮液和所述悬浮培养采用的培养基均为细胞培养基或含有如下1)‑3)中至少一种组分的细胞培养基：1)促进细胞生长组分：血清、生长因子、细胞因子、微量元素、激素、维生素、细胞信号通路抑制剂和/或激活剂；2)助于细胞附着的组分：胶原、明胶、透明质酸、纤维素、硫酸软骨素、肽、甲壳素、聚乳酸和/或水凝胶；3)抗病原体感染的组分：抗生素；所述悬滴培养的时间为2‑110小时；所述悬浮培养的时间为2‑110小时；所述悬滴培养和所述悬浮培养的条件如下：氧浓度为0.1‑50％，CO₂浓度为1‑15％，温度为30‑40℃；所述悬滴培养和所述悬浮培养均为静态培养或动态培养；所述动态培养的方式为搅拌、旋转或震荡。