一种结球甘蓝胚状体再生植株诱导方法

摘要

本发明公开了一种结球甘蓝胚状体诱导方法，包括无菌苗诱导、胚状体诱导、再生植株诱导、炼苗和移植过程，本发明解决了现有技术中以小孢子为外植体直接诱导再生植株或诱导胚状体或诱导出芽，诱导率不高的问题；本发明以下胚轴作为诱导胚状体的外植体，诱导率可达90%，胚状体诱导再生植株的诱导率可以达到90%；通过胚状体诱导再生植株，形成的再生植株遗传稳定性高，与母体没有生理隔离现象发生，增值系数高。

主权项

一种结球甘蓝胚状体再生植株的培养方法，其特征在于，步骤如下：(1)无菌苗诱导：结球甘蓝种子消毒后清洗干净，接种于无菌苗诱导培养基中，在无菌培养室中进行培养：温度18‑22℃，光照1500‑2000Lx，空气湿度50%‑60%，无菌苗培养至5‑8cm时，将无菌苗从培养室中取出，冷却的高压灭菌水清洗干净；(2)胚状体的诱导：在无菌操作台中，以无菌苗的下胚轴作为外植体，将下胚轴切成3‑4mm的小段，接种于胚状体诱导培养基中，于无菌环境中在18‑22℃、1000‑2000Lx、空气湿度65%‑70%条件下诱导胚状体发生；(3)再生植株诱导：外植体形成胚状体后，于无菌条件下，将长有胚状体的外植体用冷却的无菌水清洗干净后转移到再生植株诱导培养基中，于22‑25℃，3000‑4000Lx、空气湿度 65%‑70%条件下诱导再生植株发生；(4)炼苗、移植：将装有再生植株的培养瓶转移到室温大棚中，打开瓶塞培养5‑7d，将再生植株从培养瓶中取出、洗净根部琼脂，将再生植株移入蛭石炼苗培养基中培养7‑10d后移入大棚土壤中培养；上述甘蓝种子消毒过程为：种子用自来水清洗干净后，先于70‑75%的乙醇中消毒15s，再于体积浓度为3%的次氯酸钠溶液中消毒10min，最后用高压灭菌冷却后的自来水清洗种子；上述的无菌苗诱导培养基配方为：每 1LB5培养基中添加20‑40g/L蔗糖、5‑8g/L琼脂，高温高压灭菌后冷却至室温待用；上述的胚状体诱导培养基配方为：每 1LMS培养基中添加1‑2mg/L吲哚乙酸、0.1‑1 mg/L 6‑糖基氨基嘌呤、20‑40g/L蔗糖、5‑8g/L琼脂，高温高压灭菌后冷却至室温待用；上述的再生植株诱导培养基配方为：每1L MS培养基中添加1‑2mg/L萘乙酸、0.1‑1 mg/L 6‑糖基氨基嘌呤、20‑40g/L蔗糖、5‑8g/L 琼脂，高温高压灭菌后冷却至室温待用。