一种快速捕获杂交靶标物分支链DNA信号放大的检测方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种快速捕获杂交靶标物分支链DNA信号放大的检测方法。本发明提高了分支链DNA信号放大方法检测灵敏度，最低的检测灵敏度可以达到200～300个转录物/次灵敏度提高了4倍；极大的缩短了检测时间，由之前的OVEN(过夜反应)缩短至5～7小时内完成检测时间；与西门子bDNA技术相比QuantiMAT技术成本更加低廉、便捷性更好。通过考察250fg/ml的HIV质控品浓度，设置不同的杂交时间考察不同的磁珠的检出率差异，QuantiMAT的技术路线可以很好的检测到靶标物质，同时确保特异性。

主权项

一种快速捕获杂交靶标物分支链DNA信号放大的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：获得核酸杂交引物；将核酸目的片段按照功能属性划分为捕获功能引物区、标记功能引物区、遮盖功能引物区，分别根据所述捕获功能引物区、所述标记功能引物区、所述遮盖功能引物区获得互补引物；所述捕获功能区的引物为捕获功能区引物；步骤2：取氨基修饰的通用引物与磁珠表面的特殊基团结合，形成包被有核酸的磁珠；所述氨基修饰的通用引物与所述捕获功能区引物杂交结合；所述包被有核酸的磁珠能够特异性捕获靶标物质；步骤3：获得核酸分支链信号放大系统；系统包括了初级信号放大链和次级信号放大链；所述初级信号放大链的长度是500～560bp，包括初级放大链前置引导序列和20次重复的次级信号放大链前置引导区；所述次级信号放大链的长度是420～480bp，包括次级放大链前置引导序列和20次重复的报告探针重复区；所述初级放大链前置引导序列与步骤1中所述标记功能引物区杂交结合；所述次级放大链前置引导序列与所述初级信号放大链的20次重复的次级信号放大链前置引导区杂交结合；步骤4：获得AP偶联的报告探针；将氨基修饰的报告探针引物与碱性磷酸酶结合形成核酸/蛋白复合体，所述核酸/蛋白复合体与步骤3中所述20次重复的报告探针重复区杂交结合，获得AP标记报告探针，扩大被捕获靶标物质的信号值，检测。