一种基于3D培养体系的扩增造血干细胞的方法

摘要

本发明公开了一种基于3D培养体系的造血干细胞扩增方法，该方法包括如下步骤：(1)将血液中分离出的造血干细胞悬液置入复合培养基中培养：复合培养基包括无血清干细胞基础培养基、SIFE生长因子、血清替代物、纤维蛋白凝胶；(2)将(1)的复合培养基置入低氧培养箱中，低氧培养箱维持的氧浓度为3～20％。本发明的优点为，复合培养基添加的纤维蛋白凝胶是一种高分子网络体系，能吸收大量的水份，其结构上也与细胞外基质极为相似，能够模拟体内造血干细胞的生长微环境，从而为细胞提供充足的生长空间和支持细胞间联系的空间结构，降低了成本的同时显著增加细胞的扩增倍数，而且又维持造血干细胞的特性，防止其因分化而丧失干细胞的特性。

主权项

一种基于3D培养体系的扩增造血干细胞的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)将血液中分离出的造血干细胞悬液置入复合培养基中培养：复合培养基包括无血清干细胞基础培养基、SIFE生长因子、血清替代物、纤维蛋白凝胶；(2)将(1)的复合培养基置入低氧培养箱中，低氧培养箱维持的氧浓度为3～20％；上述SIFE生长因子为干细胞因子、FMS样酪氨酸激酶‑3配体、促红细胞生成素、白细胞介素‑3、白细胞介素‑6、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子组成；上述纤维蛋白凝胶的制备过程为：①将氨基酸序列为mqaqqyqqqr rkfaaaflaf ifilaavdta eagkkekpek kvkksdcgew qwsvcvptsg dcglgtregt rtgaeckqtm ktqrckipcn wkkqfgaeck yqfqawgecd lntalktrtg的多肽与50‑75mg冻干的纤维蛋白原偶联；②配制2 000KIU/mL抑肽酶，取配制好的抑肽酶1mL溶解多肽偶联的冻干纤维蛋白原，即得溶液A，③将凝血酶加入40mmol/LCaCl₂溶液中，配制出凝血酶浓度为250‑400u/mL的溶液B；④将溶液A和溶液B混合，在底面积为0.25cm²模具中制作成为圆柱形的复合物，置37℃保温1h，即得到纤维蛋白凝胶，4℃冰箱保存备用。