HLA基因的DNA分型方法和试剂盒

摘要

本发明的目的是提供高精度的DNA分型方法和试剂盒，其排除了相位模糊引起的不明确。本发明提供了HLA的DNA分型方法，其特征为包含以下步骤：（1）制备对人基因组碱基序列中HLA‑A、HLA‑B、HLA‑C、HLA‑DQA1、HLA‑DQB1、HLA‑DPA1和HLA‑DPB1各基因的上游区域和下游区域分别特异性退火的引物组以及对HLA‑DRB1的外显子2和3'侧非翻译区域特异性退火的引物组的步骤；（2）应用前述引物组对被测试样（DNA）进行PCR扩增的步骤；（3）确定PCR扩增产物的碱基序列的步骤；和（4）任选地，进行与数据库的同源性检索的步骤。

主权项

对人基因组碱基序列中HLA‑A、HLA‑B、HLA‑C、HLA‑DQA1、HLA‑DQB1、HLA‑DPA1和HLA‑DPB1各基因的包含外显子、内含子、5'侧与3'侧非翻译区域和启动子区域的全部区域分别特异性退火的引物组、以及对HLA‑DRB1的包含外显子2至3'侧非翻译区域的区域分别特异性退火的引物组在制备用于HLA的DNA分型的试剂盒中的应用；其中所述对HLA‑A的包含外显子、内含子、5'侧与3'侧非翻译区域和启动子区域的全部区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：1、2和3的碱基序列的寡核苷酸；其中所述对HLA‑B的包含外显子、内含子、5'侧与3'侧非翻译区域和启动子区域的全部区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：4和5的碱基序列的寡核苷酸；其中所述对HLA‑C的包含外显子、内含子、5'侧与3'侧非翻译区域和启动子区域的全部区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：6、7和8的碱基序列的寡核苷酸；其中所述HLA‑DRB1基因是DR1型，所述对HLA‑DRB1的DR1型的包含外显子2至3'侧非翻译区域的区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：9、10、11、31和32的碱基序列的寡核苷酸；其中所述HLA‑DRB1基因是DR2型，所述对HLA‑DRB1的DR2型的包含外显子2至3'侧非翻译区域的区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：11、12、31和33的碱基序列的寡核苷酸；其中所述HLA‑DRB1基因是DR3型，所述对HLA‑DRB1的DR3型的包含外显子2至3'侧非翻译区域的区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：13、14、32和34的碱基序列的寡核苷酸；其中所述HLA‑DRB1基因是DR4型，所述对HLA‑DRB1的DR4型的包含外显子2至3'侧非翻译区域的区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：15、16、31和32的碱基序列的寡核苷酸；其中所述HLA‑DRB1基因是DR5型，所述对HLA‑DRB1的DR5型的包含外显子2至3'侧非翻译区域的区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：13、14、31、35和36的碱基序列的寡核苷酸；其中所述HLA‑DRB1基因是DR6型，所述对HLA‑DRB1的DR6型的包含外显子2至3'侧非翻译区域的区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：13、14、31、32和37的碱基序列的寡核苷酸；其中所述HLA‑DRB1基因是DR7型，所述对HLA‑DRB1的DR7型的包含外显子2至3'侧非翻译区域的区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：17、18、36和38的碱基序列的寡核苷酸；其中所述HLA‑DRB1基因是DR8型，所述对HLA‑DRB1的DR8型的包含外显子2至3'侧非翻译区域的区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：13、14、31和39的碱基序列的寡核苷酸；其中所述HLA‑DRB1基因是DR9型，所述对HLA‑DRB1的DR9型的包含外显子2至3'侧非翻译区域的区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：19、20、36和38的碱基序列的寡核苷酸；其中所述HLA‑DRB1基因是DR10型，所述对HLA‑DRB1的DR10型的包含外显子2至3'侧非翻译区域的区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：21、22、31和32的碱基序列的寡核苷酸；其中所述对HLA‑DPA1的包含外显子、内含子、5'侧与3'侧非翻译区域和启动子区域的全部区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：23、24、40和41的碱基序列的寡核苷酸；其中所述对HLA‑DPB1的包含外显子、内含子、5'侧与3'侧非翻译区域和启动子区域的全部区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：25、26、42、43、44和45的碱基序列的寡核苷酸；其中所述对HLA‑DQA1的包含外显子、内含子、5'侧与3'侧非翻译区域和启动子区域的全部区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：27、28、46和47的碱基序列的寡核苷酸；其中所述对HLA‑DQB1的包含外显子、内含子、5'侧与3'侧非翻译区域和启动子区域的全部区域分别特异性退火的引物组选自具有序列编号：29、30、48、49和50的碱基序列的寡核苷酸。