HLA-B*27等位基因检测方法及其试剂盒

摘要

本发明涉及用于检测人类白细胞HLA‑B*27抗原基因的方法，包括提供待测样品、核酸扩增体系和荧光检测体系混合物；通过扩增反应循环扩增靶多核苷酸；使荧光发生基团与被扩增的靶多核苷酸序列间接结合；测定荧光发生基团产生的荧光量，确定靶多核苷酸的存在及其相对量；所述核酸扩增体系由耐热DNA聚合酶、2’‑脱氧核苷三磷酸、能够与靶多核苷酸的第一、二条链结合的引物组成。本发明还公开了与其配套使用的试剂盒。本发明方法与试剂盒应用于人HLA‑B*27等位基因检测，可实现HLA‑B*27等位基因的杂合型与纯合型的定量区分，对于HLA‑B*27等位基因强关联性疾病的早期预警更具优势。

主权项

一种用于HLA‑B*27等位基因检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：(1)分别装有反应液、EZ Taq混合液、标准液1、标准液2的多个密封离心管，(2)分隔并集中包装这些离心管的试剂盒；其中：反应液由如下组分组成：PCR反应缓冲液、2’‑脱氧核苷三磷酸、用于靶多核苷酸扩增的引物1和引物2，寡核苷酸探针为探针1；用于靶多核苷酸扩增的引物3和引物4，寡核苷酸探针为探针2；EZ Taq混合液：有效成份为热启动Taq酶；标准液1：纯合型HLA‑B*27基因组DNA；标准液2：杂合型HLA‑B*27基因组DNA；各引物和探针具体组成如下：引物1：5’‑GCTGTTCGTGAGGTTCGACA‑3’，引物2：5’‑TCCGCAGGTCCTCTCGGTCA‑3’，引物3：5’‑GGTGAAGGTCGGAGTCAACG‑3’，引物4：5’‑ACCATGTAGTTGAGGTCAATGAAGG‑3’，探针1：5’‑GCGGGGAGCCCCGCTTCATCACCGT‑3’，探针2：5’‑CGCCTGGTCACCAGGGCTGC‑3’。