化合物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了化合物及其制备方法和应用，其中，该化合物具有如式1所示的结构：利用该化合物能够将多肽N端的氨基转化为叠氮基团，进而在短肽连接制备蛋白时，将用于连接的短肽N端的半胱氨酸氨基掩蔽为叠氮基团，能够实现一次将三个短肽进行连接，即连接两个短肽后不需要立即进行分离纯化处理，在解除掩蔽后可直接进行下一个短肽的连接。

主权项

一种制备多肽的方法，其特征在于，包括：(a)提供第一短肽和第二短肽，所述第一短肽的C端形成有酰肼基团，所述第二短肽的N端为叠氮半胱氨酸，所述叠氮半胱氨酸是利用式1所示的化合物形成的；(b)将所述第二短肽进行还原处理，以便将所述叠氮半胱氨酸转化为半胱氨酸；以及(c)将所述第一短肽和步骤(b)中所得到的经过还原处理的第二短肽进行连接，以便获得所述多肽，其中，利用三(2‑羧乙基)膦对所述第二短肽进行所述还原处理，所述还原处理是在6.8‑7.2的pH下进行1小时，步骤(c)进一步包括：(c‑1)将所述第一短肽和亚硝酸钠接触，以便对所述第一短肽的酰肼基团进行氧化处理；(c‑2)将步骤(c‑1)中所得到的氧化处理产物与4‑巯基苯乙酸溶液混合，并将所得到混合物的pH调节至5；以及(c‑3)向步骤(c‑2)所得到的混合物中添加步骤(b)中所得到的经过还原处理的第二短肽，并在6.2‑6.5的pH下进行连接反应，所述第二短肽是通过以下步骤获得的：(a‑1)通过固相多肽合成方法制备第三短肽和第四短肽，所述第三短肽的N端形成有半胱氨酸基团，所述第四短肽的C端形成有酰肼基团；(a‑2)将所述第四短肽与式1所示的化合物接触，以便在所述第四短肽的N端形成叠氮半胱氨酸基团；以及(a‑3)将N端形成叠氮半胱氨酸基团的第四短肽与所述第三短肽进行连接，以便获得所述第二短肽，所述第一短肽具有如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，所述第三短肽具有如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，所述第四短肽具有如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。