氮杂化鸟嘌呤核苷及其合成方法和在DNA测序中的用途

摘要

本发明公开了一种氮杂化鸟嘌呤核苷及其合成方法和在DNA测序中的用途；所述合成方法包括如下步骤：式(Ⅲ)化合物在碱性条件下去保护基得式(Ⅱ)化合物；进一步去甲基得式(Ⅰ)化合物，即7‑去氮‑7‑卤素‑8‑氮‑鸟嘌呤核苷；其中，R₁为H或OH，R₂为I、Br或Cl，R₃为H或本发明的氮杂化鸟嘌呤核苷是用于DNA测序的新型试剂，与8位未取代氮的鸟嘌呤核苷相比，具有更好的碱基识别效果、更稳定的DNA链结构。同时，现有技术中8位氮取代鸟嘌呤核苷的合成方法复杂，产率低，尚未商业化生产，而本发明的合成方法所需原料简单易得，采用常规化学合成反应，且收率较高，适用于广泛推广使用。

主权项

一种7‑去氮‑7‑丙炔胺‑8‑氮‑2'‑脱氧鸟嘌呤核苷酸的合成方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：A、式(Ⅲ)化合物在碱性条件下去保护基得式(Ⅱ)化合物；B、所述式(Ⅱ)化合物在碱性条件下去甲基得式(Ⅰ)化合物，即所述7‑去氮‑7‑卤素‑8‑氮‑脱氧鸟嘌呤核苷；其中，R₁为H，R₂为I、Br或Cl，R₃为H；所述在碱性条件下去甲基是在氢氧化钠和二氧六环存在的条件下进行的；C、化合物dG(8‑aza)(AP₃)的合成：在CuI、Pd(PPh₃)₄和TEA存在的条件下，三氟乙酰丙炔胺和式(Ⅰ)化合物反应，得化合物dG(8‑aza)(AP₃)，式(Ⅰ)中R₁为H，R₂为I、Br或Cl，其中，所述式(Ⅰ)化合物、三氟乙酰丙炔胺、CuI、Pd(PPh₃)₄和TEA的摩尔比为1:(2～3):0.072:0.025:(1.5～2)；D、化合物dG(8‑aza)TP(AP₃)的合成：化合物dG(8‑aza)(AP₃)与三正丁胺焦磷酸盐、2‑氯‑4H‑1,3,2‑苯并二氧磷‑4‑酮,在TEA和I₂存在的条件下反应，反应产物去保护，得化合物dG(8‑aza)TP(AP₃)，即所述7‑去氮‑7‑丙炔胺‑8‑氮‑2'‑脱氧鸟嘌呤核苷酸，其中，所述三正丁胺焦磷酸盐、2‑氯‑4H‑1,3,2‑苯并二氧磷‑4‑酮和化合物dG(8‑aza)(AP₃)的摩尔比为2:2:1。