接骨木镰刀菌检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明属于植物病原真菌的种类分子鉴定技术领域。目的是提供一种基于聚合酶链式反应（PCR）的简便快速的检测植物病原真菌接骨木镰刀菌（Fusarium sambucinum）的试剂盒及检测方法。检测试剂盒包括一对鉴定接骨木镰刀菌的特异引物序列和Mix，一对引物序列分别为：Fs‑F：5’‑GAC CCA AAT CTA AGC TCG CC‑3’；Fs‑R：5’‑GAA GGG CAT GTC GCT CAA G‑3’。检测方法为：利用Fs‑F和Fs‑R引物对接骨木镰刀菌的基因组DNA进行PCR扩增，可以获得长度为309 bp的特异性扩增片段，非接骨木镰刀菌不能扩增获得此片段。PCR反应对接骨木镰刀菌基因组DNA浓度的检测极限可达70‑100 pg/μL。利用本发明，可准确、方便、快速地检测接骨木镰刀菌。

主权项

一套接骨木镰刀菌的检测试剂盒，其特征在于：试剂盒包括一对特异性引物序列和Mix；引物DNA序列为：Fs‑F：5’‑GAC CCA AAT CTA AGC TCG CC‑3’，Fs‑R：5’‑GAA GGG CAT GTC GCT CAA G‑3’；试剂盒中Mix的成分为Taq酶0.1‑0.3U/μL、dATP 0.03‑0.10mM、dTTP 0.03‑0.10mM、dGTP 0.03‑0.10mM、dCTP 0.03‑0.10mM、MgCl₂ 0.3‑1.0mM、KCl 130‑150mM、pH 9.0‑9.5Tris‑HCl 20‑30mM、1％Triton X‑100及稳定剂。