发明名称 一种同时显示肥大细胞与嗜酸性细胞的染色方法
摘要 本发明涉及生物技术领域,提供了一种同时显示肥大细胞与嗜酸性细胞的染色方法,采用甲苯胺蓝染色液和改良瑞氏‑吉姆萨染色液相结合的染色方法,在同一张组织学切片上显示肥大细胞和嗜酸性细胞,肥大细胞的细胞质呈现紫红色或蓝紫色,而嗜酸性细胞的细胞质呈现粉色,其他组织结构为蓝色或淡蓝色。本方法解决了分别染色后因位置结构差异难以准确判定试验结果的难题,本染色方法不仅直观性强,而且是在同一个断面上显示,保证试验结果的准确性。
申请公布号 CN105842037A 申请公布日期 2016.08.10
申请号 CN201610160520.8 申请日期 2016.03.21
申请人 山东农业大学 发明人 黄丽波;姜淑贞;袁学军
分类号 G01N1/30(2006.01)I 主分类号 G01N1/30(2006.01)I
代理机构 济南舜源专利事务所有限公司 37205 代理人 苗峻;赵斌
主权项 一种同时显示肥大细胞与嗜酸性细胞的染色方法,其特征在于:采用甲苯胺蓝染色液和改良瑞氏‑吉姆萨染色液相结合的染色方法,其中所述的甲苯胺蓝染色液每150毫升配制方法如下:配制A液:将1.0‑1.2克甲苯胺蓝放入100毫升的蒸馏水内,使甲苯胺蓝完全溶于蒸馏水中;配制B液:将0.9‑1.0克高锰酸钾放入50毫升的蒸馏水内,使高锰酸钾完全溶于蒸馏水中;将已经配制好的A液在1000℃电磁炉上煮沸10分钟,再将配制好的B液慢慢滴入A液中,形成甲苯胺蓝混合染液;将混合染液继续煮沸10分钟,使甲苯胺蓝充分被氧化;将经过煮沸的混合染液用蒸馏水补足使该混合染液的总体积为150毫升,室温下使甲苯胺蓝混合染液自然冷却,过滤后即为甲苯胺蓝染色液;所述改良瑞氏‑吉姆萨染色液配制包括瑞氏染色液的配制和吉姆萨染色液的配置,以及pH 6.4的磷酸缓冲液的配制,具体配制方法如下:瑞氏染色液的配制:将0.2‑0.3克Wright’s色素粉剂倒入100毫升的甲醇中,搅拌使Wright’s色素粉剂完全溶解在甲醇液体中,而后将此溶液放入棕色试剂瓶中保存,室温放置30天后可以使用;吉姆萨染色液的配制:将1.8‑2.0克Giemsa’s色素粉剂倒入100毫升的甲醇中,搅拌使Giemsa’s色素完全溶解在甲醇中;另将100毫升的甘油液体在水浴锅内加热,水浴锅温度为58‑60℃,加热时间持续120‑140分钟,将加热后甘油慢慢加入到上述Giemsa’s色素与甲醇的染液中,将三者充分混匀后再放入37℃恒温箱中保存10‑11小时,取出混合液体装入棕色试剂瓶中保存,室温放置48小时后可以使用;pH6.4的磷酸缓冲液的配制:将6.63克磷酸二氢钾和56.0克磷酸氢二钠粉剂倒入体积为1000毫升的蒸馏水中,搅拌后使磷酸二氢钾和磷酸氢二钠完全溶解在蒸馏水中,检测溶液的pH值,并用磷酸二氢钾或磷酸氢二钠调整溶液的pH值为6.4。
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