一种基于微球和微柱阵列芯片的乳滴数字PCR定量方法

摘要

本发明涉及一种基于微球和微柱阵列芯片的乳滴数字PCR定量方法，包括：(1)制备微柱阵列芯片；(2)抽取表面修饰链霉亲和素的聚苯乙烯微球，稀释后分步加入到目标磁珠的悬浊液中孵育，富集微球磁珠复合物，重悬；(3)取步骤(2)中的微球磁珠复合物的重悬液，通入到装置中冲洗，通过统计芯片上截留的微球磁珠复合物，得到目标磁珠的个数，从而达到对核酸高灵敏定量的目的。本发明芯片组装简单，成本低；在保留了BEAMing实验高灵敏度特点的同时使得BEAMing技术的目标磁珠计数方法更加方便易行，为核酸的高灵敏检测提供了一个简便、快速的实用工具。

主权项

一种基于微球和微柱阵列芯片的乳滴数字PCR定量方法，包括：(1)将硅片清洗、涂胶后采用深反应离子刻蚀在硅片上刻蚀出微柱阵列，微柱阵列之间的间距随行数减小，采用等离子去胶工艺去除残胶后得到硅片模具；将硅片模具硅烷化，将配制好的PDMS浇筑在硅片模具上，PDMS加热固化后剥离即得到微柱阵列芯片；(2)抽取表面修饰链霉亲和素的聚苯乙烯微球，稀释后分步加入到BEAMing实验中生物素修饰的目标磁珠的悬浊液中孵育，富集微球磁珠复合物，重悬；(3)取步骤(2)中的微球磁珠复合物的重悬液，通入到微柱阵列芯片中冲洗，通过统计芯片上截留的微球磁珠复合物，得到目标磁珠的个数。