一种产脲酶菌株的固定化及其应用

摘要

本发明涉及一种产脲酶菌株的固定化及其应用，固定生产脲酶的根瘤菌属细菌，并将其应用于清除食品尿素中。本发明研究了细胞固定化的最适条件以及游离细胞和固定化细胞的最适pH、最适温度、温度稳定性和pH稳定性，用响应面方法优化固定化细胞的最优条件为：1.96％琼脂，1.42％细胞和pH 9.0，固定化后，细胞的脲酶活性提高了约1.5倍，最适反应温度由40℃上升到50℃。最后还研究了固定化细胞在清除尿素中的应用，尿素清除实验显示固定化细胞对部分酒类和牛奶具有良好的效果。将固定化的菌株细胞加入到5种市售的产品中，在35℃保温24小时，结果显示，10％‑92.8％的尿素可以被清除，具有良好的应用价值。

主权项

一种产脲酶菌株固定化的方法，其特征在于：按照下述步骤进行：步骤一，筛选培养产脲酶的根瘤菌属细菌，挑取单克隆菌株接种到液体培养基中，形成具有产脲酶菌株游离细胞的种子液；步骤二，调整所述种子液pH值为4‑11，20‑50℃发酵形成发酵液，检测所述发酵液中脲酶酶活力；步骤三，收集所述发酵液中的菌体，用缓冲液复溶形成悬浮细胞液(20mM，pH 7.0)，将所述悬浮细胞液加入到细胞固定化载体中，混匀后放入4℃冷却硬化形成固定化脲酶菌株细胞；步骤四，将所述固定化脲酶菌株细胞分割成小体积并检测脲酶酶活力。