一种快速检测食品中志贺氏菌的试剂盒

摘要

本发明提供了一种检测食品中志贺氏菌的有扩增内标的PCR试剂盒，涉及生物技术领域，本方法使用方便、可靠性好、检测周期短、灵敏度高、特异性强、成本低廉、操作步骤简单，适用于高通量操作、标准化操作，且能避免因为样品存在DNA聚合酶的抑制因子而得到假阴性结果导致的误判，可用于多种食品中志贺氏菌的检测等。所述方法包括：（1）利用primer premier 6.0软件设计的针对志贺氏菌的一对特异性引物ipaHF/ipaHR，再增加扩增原核生物16S rDNA保守序列的27F/1492R引物作为扩增内标，2对引物共同进行扩增；（2）取待检测样品增菌培养6‑8小时，培养后的增菌液采用煮沸冻融法提取基因组DNA作为模板进行扩增；（3）取试剂盒的PCR反应预混液配置25μl反应体系进行扩增，琼脂糖凝胶电泳后紫外灯下观察检测结果。

主权项

一种快速检测食品中志贺氏菌的试剂盒，其特征是：该试剂盒包含：无菌去离子水、PCR反应预混液、对照品和DNA染料；所述PCR反应预混液含有PCR反应缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸、Taq DNA聚合酶，检测用引物；所述检测用引物为志贺氏菌的特征性引物ipaHF、ipaHR和扩增内标引物27F、1492R，其序列分别为：ipaHF：GAATTTACGGACTGGTTCTCCCTCTGG；ipaHR：GTGATTATGAATGGTGCAGTCGTGAGC；27F ：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；1492R：TACGGYTACCTTTGTTACGACTT；所述对照品分为阴性对照品和阳性对照品，阴性对照品模板为无菌去离子水，阳性对照品模板为ipaHF / ipaHR的扩增产物连接至T载体后获得的质粒基因组。