一种黄曲霉毒素免疫亲和柱及其制备方法和用途

摘要

本发明涉及一种黄曲霉毒素免疫亲和柱及其制备方法和用途。该免疫亲和纯化柱利用蛋白G偶联到琼脂糖凝胶载体上，然后用抗黄曲霉毒素的抗体与琼脂糖上的蛋白G偶联。然后再利用交联剂对黄曲霉毒素抗体‑蛋白G‑琼脂糖凝胶载体进行交联后装填亲和柱。该免疫亲和柱主要用于对于食品、饲料、牛奶、血样以及其他多种样本中的黄曲霉毒素的纯化，以便于后期对样本中黄曲霉毒素的高效液相色谱(HPLC)检测和荧光检测。

主权项

一种纯化黄曲霉毒素的免疫亲和柱的制备方法，其特征在于 (1)载体活化选择琼脂糖载体sepharose4B，以环氧氯丙烷活化法进行活化，取2％的预溶胀的琼脂糖凝胶sepharose4B，用20倍体积的蒸馏水充分冲洗，称取滤去水分后的湿凝胶5克，加入7.5毫升0.8M的NaOH，30％的环氧氯丙烷2毫升，5毫升2mg/ml的硼氢化钠NaBH₄，反应后用蒸馏水洗涤；(2)将蛋白G与活化载体sepharose4B的偶联将活化好的琼脂糖凝胶sepharose4B用0.1M NaHCO₃、0.8M NaCl，pH8.9偶联缓冲液洗涤，加入2mg/ml的蛋白G，室温偶联，将偶联好的琼脂糖载体用20mM，pH7.4的磷酸缓冲液PBS洗涤3次，制成蛋白G‑sepharose；(3)抗黄曲霉毒素抗体与蛋白G‑sepharose载体上的蛋白G连接将抗黄曲霉毒素抗体溶于20mM、pH7.4的PBS中，终浓度2mg/ml，将抗体加入用20mM、pH7.4的PBS缓冲液洗涤过的蛋白G‑sepharose中，室温结合，结合后的载体用PBS洗涤，连接有抗体的载体命名为抗体‑蛋白G‑sepharose；(4)载体交联将抗体‑蛋白G‑sepharose用0.1M pH9.0的硼酸缓冲液洗涤3次，然后加入0.1M pH9.0的硼酸缓冲液，在缓冲液中加入庚二亚氨酸二甲酯DMP至终浓度20mM，室温交联1小时，加入50mM、pH9.0的乙醇胺终止反应，用50mM的乙醇胺封闭10分钟，交联后的抗体‑蛋白G‑sepharose载体用20mM、pH7.4的PBS洗涤3次；(5)装柱将交联后的抗体‑琼脂糖载体根据需要装入层析柱中，根据需要制备不同容量的黄曲霉毒素亲和纯化柱。