一种改性纤维素固定化脂肪酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种改性纤维素固定化脂肪酶的制备方法，属于脂肪酶制备领域。本发明以竹笋为原料，经酸溶酶解制得竹笋纤维，再用氢氧化钠碱化，过氧化氢和铜的催化作用下氧化改性其表面基团，最终浸渍并真空冻干固化，从而得到改性纤维素固定化脂肪酶的制备方法。本发明方法独特新颖，制备过程简单易行，不仅利用纤维素的空间结构和柔性，并有大量的自由羟基，经改性后与酶蛋白分子中的氨基、巯基、咪唑基、吲哚基等官能团共价结合，具有极佳的相容性，而且不影响酶的活性和反应能力，提高了酶的结合率和比活力，具有巨大的结合容量，适合大规模推广应用。

主权项

一种改性纤维素固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）称取1～2kg竹笋，剥皮取笋芯切成粒径为3～5mm的小块，放入烘箱中在105～110℃下干燥12～15h，将干燥后的笋块放入气流粉碎机中粉碎并过100目标准筛，得到竹笋粉末；（2）将400～500g竹笋粉末倒入其体积5～8倍浓度为0.1mol/L盐酸溶液中，放置在摇床上振荡浸渍过夜，去除酸溶性杂质并转入布氏漏斗，用去离子水抽滤洗涤3～5遍，自然风干得到预处理后的竹笋粉末；（3）按质量比为100:1将上述预处理后的竹笋粉末和复合酶制剂一起装入陶瓷发酵罐中，再加入两者总体积3～5倍的去离子水，搅拌均匀后放入恒温箱，在40～50℃下保温酶解4～6h，其中复合酶制剂是由淀粉酶和中性蛋白酶按质量比为1:1复配制得；（4）酶解结束后，将酶解液移入卧式离心机，以3000～4000r/min转速离心10～15min，分离去除上清液，得到下层竹笋纤维素沉淀，将分离得到的竹笋纤维素倒入其体积2～3倍浓度为0.05mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌碱化反应1～2h后过滤干燥，得到碱化竹笋纤维素；（5）将上述制得的碱化竹笋纤维素分别用质量浓度为30%过氧化氢溶液和质量浓度为10%尿素溶液持续冲洗5～10min后迅速放入三口烧瓶中，向瓶中加入一根3～5cm长的铜丝后以5mL/min速率通入氧气直至置换出瓶中所有空气，再用保鲜膜密封瓶口，于烈日下曝晒3～5h，得到改性竹笋纤维素；（6）将上述制得的改性竹笋纤维素浸入其体积2～3倍浓度为15g/L脂肪酶溶液中，放入超声振荡仪于4～6℃下超声振荡浸渍6～8h后保温固定16～18h，过滤将滤渣放入真空冻干机中干燥，即得改性纤维素固定化脂肪酶。