一种筛选PD-1抗体的方法

摘要

本发明涉及一种筛选PD‑1抗体的方法，所述方法包括：将人PD‑1和PD‑L1全长基因分别构建到慢病毒表达载体中；然后分别转染到T和B淋巴细胞株；筛选出稳定表达的淋巴细胞；随后加入PD‑1单克隆抗体和T细胞超抗原SEE共同孵育48小时；最后根据上清中IL‑2含量的高低筛选所需的PD‑1单克隆抗体。本发明方法与SEB刺激全血分泌IL‑2的实验相比，在重复性和精确度方面更加优越，并且显著降低了实验成本，减少了操作人血液带来的各种潜在风险。

主权项

一种筛选PD‑1单克隆抗体的方法，包括以下步骤：1)、将人PD‑1和PD‑L1全长基因分别构建到慢病毒表达载体中；2)、将构建好的PD‑1表达载体通过慢病毒转染的方法稳定转染到T淋巴细胞株；将构建好的PD‑L1表达载体通过慢病毒转染的方法稳定转染到B淋巴细胞株；3)、用抗生素G418筛选出稳定表达PD‑1的T淋巴细胞和稳定表达PD‑L1的B淋巴细胞；4)、筛选后的稳定表达PD‑1的T淋巴细胞和稳定表达PD‑L1的B淋巴细胞按照合适的比例混合后，加入梯度稀释的PD‑1单克隆抗体和T细胞超抗原SEE，然后共同孵育48小时；5)、检测细胞培养上清中的IL‑2含量，根据IL‑2含量的高低筛选所需的PD‑1单克隆抗体。