一种利用迭代同源重组体内进化目标蛋白质的新方法

摘要

本发明涉及一种利用迭代同源重组体内进化目标蛋白质的新方法。其特征在于：首先在体外通过两步PCR制备得到带突变的单链核苷酸并用DNase I酶切，回收80‑100nt片段构成目标蛋白质的单链核苷酸突变库；以此单链突变库转化大肠杆菌，通过λ‑Red同源重组技术建立含有目标蛋白质突变体的大肠杆菌菌群；再次将上述单链突变库转化含有目标蛋白质突变体的大肠杆菌菌群，形成更大库容量的大肠杆菌菌群；再次转化大肠杆菌的操作循环2‑6次，构建含有目标基因突变的大肠杆菌突变库；最后通过高效筛选或高通量筛选获得目标蛋白质突变体。这一技术可应用于微生物基因原位进化，提高酶催化活性，并应用于提高微生物代谢产物的产率。

主权项

一种利用迭代同源重组体内进化目标蛋白质的新方法，其特征在于它包括以下步骤：构建一个80‑100nt的单链核苷酸目标基因突变库，通过λ‑Red同源重组技术，利用所述突变库对大肠杆菌基因组上的蛋白质基因进行原位迭代重组，构建含有目标基因突变的大肠杆菌突变库，达到进化酶分子结构提高酶催化效率的目的。