一种基于FISH技术分离耐碱硫氧化菌的方法

摘要

本发明属于环境微生物领域，具体公开了一种基于FISH技术分离耐碱硫氧化菌的方法。本发明的方法：选取高度富集的活性污泥，经梯度稀释后涂布在固体培养基平板上，在生化培养箱中倒置培养，对培养后不同形态的菌落进行FISH检测，根据FISH结果，对目标菌落进行分离培养，直至获得纯培养单菌落。纯菌在含硫化物的液体培养基中振荡培养以测定菌株的硫氧化活性。本发明采用的FISH技术可在细胞群体水平上对分离源中的硫氧化菌进行定性检测和识别，作为传统平板划线分离的辅助方法，该方法可以加快对目标菌的分离。

主权项

一种基于FISH技术分离耐碱硫氧化菌的方法，其特征在于步骤如下：1)从生物脱硫反应器中采集硫氧化菌富集的污泥样品；2)将步骤1)采集的污泥样品按体积比1:5的比例加入无菌水，同时放入玻璃珠，在转速为160r/min的条件下震荡培养24h，得到菌悬液；3)对步骤2)的菌悬液进行梯度稀释制得不同稀释度的菌液，再各取0.1mL分别加入到不同的固体培养基上，均匀涂抹后，于25℃恒温培养2～3天；4)挑选出菌落数在20个以上的固体培养基，把其中不同形状的菌落逐一取出，分别转移到不同的无菌水中，制成菌液待用；5)分别取步骤4)中不同的菌液10μL滴加至不同的载玻片上，晾干后依次置于50％,80％和100％的酒精溶液中脱水，再与杂交液和及特异性硫氧化菌探针均匀混合，在46℃条件下杂交1.5h，完毕后清洗干净杂交液并晾干，采用双光子激光共聚焦显微镜拍摄FISH图像；6)挑选出通过FISH技术确定为硫氧化菌的菌落，转移到固体培养基平板上，继续25℃恒温培养，待形成菌落，再按照上述方法重复挑选，直至分离获得纯化的耐碱硫氧化菌菌株。