对动物卵母细胞内的染色体和纺锤体进行量化的方法

摘要

本发明涉及对动物卵母细胞内的染色体和纺锤体进行量化分析的方法，其包括以下步骤：对动物卵母细胞内的染色体和纺锤体进行荧光染色，其中，染色体和纺锤体被不同的荧光染料染色；利用荧光成像系统，对经过荧光染色的染色体和纺锤体进行成像，以便获得该染色体和纺锤体的三维荧光图像；以及基于该三维荧光图像，对卵母细胞内的染色体和纺锤体的特征参数进行量化分析。利用该方法能够有效地对动物卵母细胞内的染色体和纺锤体进行量化分析，准确获得其形态、形状和空间分布情况。

主权项

一种对动物卵母细胞内的染色体和纺锤体进行量化分析的方法，其特征在于，包括以下步骤：对动物卵母细胞内的染色体和纺锤体进行荧光染色，其中，利用第一荧光染料Hoechst 33342对所述染色体进行荧光染色，利用第二荧光染料QD 585对所述纺锤体进行荧光染色；所述动物卵母细胞处于第一次减数分裂中期或第二次减数分裂中期；利用荧光成像系统，对经过荧光染色的染色体和纺锤体进行成像，以便获得所述染色体和纺锤体的三维荧光图像；其中，荧光成像系统中图像采集部分为：近红外飞秒激光经二色片TS1反射，及100×oil物镜聚焦到样品焦平面上，以激发标记纺锤体的QD 585和标记染色体的Hoechst 33342；纺锤体和染色体的荧光信号经同一物镜收集，通过另外一个二色片VHS分束，分别被两个光电倍增管探测器PMT接收；其中PMT1接收来自纺锤体的荧光信号，PMT2接收染色体的荧光信号；以及基于所述三维荧光图像，对所述卵母细胞内的染色体和纺锤体的特征参数进行量化分析；所述量化分析进一步包括：从所述三维荧光图像中，分割出所述染色体和纺锤体的图像；利用所述染色体和纺锤体的图像，对所述染色体和纺锤体进行三维空间重构，以便获得所述染色体和纺锤体的立体图像；以及基于所述染色体和纺锤体的立体图像确定所述染色体和纺锤体的特征参数；所述对纺锤体荧光染色步骤为：1)利用2.5％的戊二醛，将所述动物卵母细胞于室温下，进行戊二醛固定30min；2)利用0.01M PBS将经过戊二醛固定的动物卵母细胞清洗三遍后，于室温下，利用0.5％Triton X‑100进行打孔处理20min；3)利用0.01M PBS将经过打孔处理的动物卵母细胞清洗三遍后，于室温下，利用山羊血清进行封闭处理20min；4)于4℃下，将一抗——兔抗β‑tubulin或α‑tubulin与经过封闭处理的动物卵母细胞一起孵育过夜，以便获得结合一抗的动物卵母细胞；5)利用0.01M PBS将上述获得的结合一抗的动物卵母细胞清洗三遍后，于室温下，与二抗——山羊抗兔生物素化IGG一起孵育30min，以便获得结合二抗的动物卵母细胞；6)利用0.01M PBS将上述获得的结合二抗的动物卵母细胞清洗三遍后，于37℃下，与荧光三抗——卵白素化量子点QD585一起孵育60min，以便获得结合荧光三抗，完成纺锤体荧光标记的动物卵母细胞。