| 摘要 |
1. Способ получения условно нокаутного аллеля в клетке, содержащей ген-мишень, включающий стадии, на которых:a. вводят в клетку донорный конструкт, содержащий 5′-концевую область гомологии, 5′-концевой сайт распознавания рекомбиназы, донорную последовательность, 3′-концевой сайт распознавания рекомбиназы и 3′-концевую область гомологии, причем донорная последовательность содержит последовательность-мишень, имеющую по меньшей мере одну нейтральную мутацию; иb. вводят в клетку последовательность-специфическую нуклеазу, которая расщепляет последовательность внутри гена-мишени, тем самым образуя условно нокаутны аллель в клетке.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что последовательность-специфическая нуклеаза представляет собой нуклеазу "цинковые пальцы" (ZFN).3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что последовательность-специфическая нуклеаза является подобной активатору транскрипции эффекторной нуклеазой (TALEN).4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что последовательность-специфическая нуклеаза представляет собой димер ZFN, который расщепляет ген-мишень только один раз.5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что последовательность-специфическая нуклеаза представляет собой РНК-направляемую нуклеазу.6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что рНК-направляемая нуклеаза представляет собой Cas9.7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что последовательность-специфическую нуклеазу вводят в виде белка, мРНК или кДНК.8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что сайт распознавания рекомбиназы представляет собой сайт loxP, сайт frt или сайт rox.9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что донорная последовательность содержит семь молчащих мутаций.10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что гомология последовательностей ме |
