一种外源基因DNA片段克隆到质粒载体相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点的方法

摘要

本发明公开了一种外源基因DNA片段克隆到质粒载体相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点的方法。质粒载体用限制性内切酶A/B、A/C分别酶切，得到AB、BA及AC、CA四个DNA片段。(B、C为质粒载体上相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点)。外源基因DNA片段用限制性内切酶B、C酶切，得到BC片段。AB、BC、CA与AC、BC、BA这三个DNA片段分别进行连接、转化，涂布在筛选平板上培养，再挑取单菌落进行筛选，可以得到外源基因连入质粒载体正反两个方向的重组质粒。本发明的优点是：使用本发明构建的质粒载体，无法进行双酶切的相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点也可作为克隆外源基因DNA片段的选择；另外，外源基因DNA片段连入载体的两个方向也可实现。

主权项

一种外源基因DNA片段克隆到质粒载体相邻或重叠的限制性内切酶酶切位点的方法，其特征在于，操作步骤为：将质粒载体分别用限制性内切酶A/B及A/C进行双酶切，胶回收后获得AB、BA及AC、CA四个DNA片段；外源基因DNA片段用限制性内切酶B、C分步或双酶切，得到BC片段；AB、BC、CA与AC、BC、BA这三个DNA片段分别进行连接、转化，涂布在筛选平板上培养，再挑取单菌落进行筛选，可以得到外源基因连入质粒载体正反两个方向的重组质粒。