一种I型和V型胶原蛋白的制备方法

摘要

本发明属于食品生物技术领域，具体涉及一种I型和V型胶原蛋白的制备方法。主要技术方法如下：将去除鱼鳞及皮下组织的鱼皮，清洗，沥干，剪碎，烘干，粉碎后浸泡于0.1 M NaOH溶液，搅拌后离心取沉淀，洗至接近中性，然后置于预冷水中，加入乙酸和胃蛋白酶后搅拌，离心取上清液，加入NaCl后盐析，离心将沉淀溶解于含NaCl的Tris‑HCl缓冲液中，离心后取上清液，再加入NaCl盐析，离心后分别收集沉淀和上清液：（1）将沉淀溶解，透析，冻干，即得I型胶原蛋白；（2）上清液中再加入NaCl后盐析，离心后取沉淀，溶解，透析，冻干，即得V型胶原蛋白，所有操作均在4°C下进行。本发明利用分级盐析的方法制备I型和V型胶原蛋白，工艺简单，可操作性强，成本低，效率高。

主权项

一种I型和V型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，按照以下步骤进行：（1） 原料的预处理：将去除鱼鳞及皮下组织的鱼皮，用自来水清洗，沥干，剪碎，烘干，粉碎，浸泡于NaOH溶液，搅拌，离心取沉淀，用自来水冲洗后烘干；（2） 胶原蛋白的提取：将预处理过的鱼皮置于预冷水中，加入乙酸和胃蛋白酶，搅拌后离心取上清液，缓慢加入NaCl粉末至混合液中，盐析过夜，再次离心，所得白色沉淀即为胶原蛋白粗品；（3）胶原蛋白的纯化：将上述胶原蛋白粗品充分溶解于含有NaCl的Tris‑HCl缓冲液中，离心取上清液，加入NaCl至上清液中，盐析，再次离心，分别收集沉淀和上清液：A. 将沉淀溶解于第一乙酸溶液中，用第二乙酸溶液透析后，冷冻干燥，即得I型胶原蛋白；B. 向上清液中再次加入NaCl至混合液中，盐析，离心取沉淀，同步骤A中I型胶原蛋白操作，溶解，透析，干燥后即得V型胶原蛋白；步骤（1）中所述粉碎后的鱼皮与NaOH溶液比例为1g:50‑100mL；所述NaOH溶液浓度为0.1mol/L；步骤（2）中所述胃蛋白酶在水中的质量分数为0.1%；步骤（3）中所述Tris‑HCl缓冲液浓度为0.05 mol/L并含有1.0 mol/L NaCl，pH 7.5；步骤（2）中所述乙酸在水中的浓度为0.1‑0.5 mol/L；所述搅拌时间为36‑48h；所述加入NaCl粉末的混合液中NaCl的浓度为2.0 mol/L；所述搅拌后离心为100,000g离心60min，所述再次离心为100,000g离心 15 min。