产卡那霉素B工程菌及其构建和应用

摘要

本发明公开了高产卡那霉素B基因工程菌及其构建和应用。本发明先对黑暗链霉菌中安普霉素生物合成基因aprD3‑D4进行框内敲除，然后进一步敲除氨甲酰转移酶基因tobZ，得到大量积累卡那霉素B的生产菌株Streptomyces tenebrarius 314 (△aprD3‑D4+△tobZ)。本发明的菌株产量高，品质好，组份单一，遗传稳定，可用于大规模生产卡那霉素B，解决了长期以来需要从卡那霉素A生产过程中的残液，分离少量卡那霉素B的困局，实现了直接发酵生产卡那霉素B的独特优势，达到了低成本，低能耗，不产生二次污染的洁净生产目的，开创了全新的制备卡那霉素B新方法，解决了阿贝卡星及地贝卡星合成原料紧缺的难题，具有良好的应用前景。

主权项

产卡那霉素 B 工程菌，其特征是：该菌株被命名为黑暗链霉菌（Streptomyces tenebrarius ）314 (△aprD3‑D4 +△tobZ )，于2013年9月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCC 8286，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；所述的产卡那霉素B工程菌的构建方法，主要包括以下步骤：1）敲除aprD3‑D4 基因载体构建；2）敲除aprD3‑D4 基因载体接合转移导入黑暗链霉菌；3）敲除aprD3‑D4 基因突变株的筛选；4）敲除aprD3‑D4 基因工程菌发酵产物分析；5）敲除tobZ基因载体构建；6）敲除tobZ 基因载体导入黑暗链霉菌；7）敲除tobZ 基因突变株的筛选；8）敲除tobZ 基因工程菌发酵产物分析。