一种对虾胚胎细胞的分离与培养方法

摘要

本发明建立一种有效的对虾胚胎细胞解离与培养技术，并将其应用于对虾胚胎细胞建系研究。本发明优化了对虾胚胎的无菌消毒处理技术，可直接从对虾育苗厂收集虾卵，运回实验室后处理，尤其是碘伏的处理浓度的优化，既保证有效控制微生物和原生动物的污染，又最大程度降低碘伏对胚胎的毒性；优化了对虾完全培养基的配方，为对虾胚胎细胞的贴壁和生长提供了更合适的营养条件，贴壁更快，生长更好，同时简化了培养基的配方，降低了培养基的成本；采用由适当孔径不锈钢滤网制作的胚胎细胞收集器，捣碎对虾胚胎的方法，可在短时间内获得大量活的胚胎细胞和细胞团，操作简便快速，仅用数秒，不易污染，效果远超已报道的其它解离方法。

主权项

一种对虾胚胎的清洗方法，其特征在于，所述的方法是用吸管收集对虾胚胎至离心管中，无菌海水洗涤5‑6次，再将胚胎转移到70目不锈钢滤网中，淘洗数次后，流水连续冲洗1‑2h，然后用10％碘伏处理5‑10分钟，再用75％酒精漂洗20‑30秒去除碘伏；然后依次用添加有2000IU/mL青霉素和链霉素的无菌海水和PBS漂洗去除酒精；最后暂存于对虾基础培养基中。