一种用于昆虫鉴定的RDB检测膜条、检测方法和试剂盒

摘要

一种用于昆虫鉴定的RDB检测膜条、检测方法和试剂盒，膜条包括通用引物、固相载体、固定在载体上的探针以及PCR阳性质控质粒，通用引物为简并引物对TF/TR，固相载体是Biodyne C膜，固定在载体上的探针是由一组质控探针和RDB检测探针组成的阵列。质控探针包括显色点探针、阳性对照探针和阴性对照探针。RDB检测探针均为一段15～19nt的寡核苷酸，5′端都标记有氨基(-NH2)。能够快速、准确、直观的对昆虫的成虫、幼虫、卵以及蛹等实现准确分类鉴定，解决了传统形态学昆虫鉴定需要专业分类知识、模式标本比对和昆虫种类多、鉴定困难的难题，特别是不能有效鉴定昆虫幼虫、卵、蛹以及鉴定特征有损坏的成虫的难题。

主权项

一种用于昆虫鉴定的RDB检测膜条，包括通用引物、固相载体、固定在载体上的探针以及PCR阳性质控质粒，所述通用引物为简并引物对TF/TR，所述固相载体是Biodyne C膜，其特征在于：所述固定在载体上的探针，是由一组质控探针和RDB检测探针组成的阵列；所述质控探针包括显色点探针、阳性对照探针和阴性对照探针；所述显色点探针，是具有序列表中Seq ID No.1所示的序列，5'－NH₂‑CAATTGCCTGGGATGTTAC‑biotin－3'，这是一条19nt的寡核苷酸，序列与鞘翅目昆虫序列无同源性，5'端氨基(‑NH₂)修饰，3'端生物素标记；所述阳性对照探针，是序列表中Seq ID No.2所示的序列，5'－NH₂‑TGAGACCAACCAACTGAAACG－3'，这是一条能和阳性质粒特异结合，阳性质粒上克隆有一段共194nt的序列，这段序列的5'端和3'端分别与简并引物对TF/TR互补，其中TF的5'端氨基(‑NH₂)修饰；所述阴性对照探针，是具有序列表中Seq ID No.3所示的序列，5'－NH₂‑GACTATAGTATAAGCGCGGTCCA－3'，这是一条23nt的寡核苷酸，序列与鞘翅目昆虫序列无同源性，5'端氨基(‑NH₂)修饰；所述RDB检测探针，均为一段15～19nt的寡核苷酸，5′端都标记有氨基(‑NH₂)；所述RDB检测探针的序列为编号为Seq ID No.7～Seq ID No.27的21种探针序列中的一种或者多种；所述简并引物对TF/TR序列如下：正向引物TF：Seq ID No.4，序列5'－biotin－ACA IGA AAG AGG IAA AAA IGA A－3'；反向引物TR：Seq ID No.5，序列5'－ATI GCI AAT ACI GCI CCT AT－3'，其中I代表次黄嘌呤，可以与A、C、T配对。