一种苹果病毒检测方法及其使用的检测试剂盒

摘要

本发明涉及植物病毒的检测领域，特别涉及一种苹果病毒的检测方法。苹果病毒检测方法以巯基标记的DNA和荧光基团标记的DNA作为探针，二者杂交形成双链DNA，双链DNA探针组装在纳米金颗粒上构建纳米金核酸探针，通过双链取代的方式检测植物病毒并对碱基突变序列进行区分。该发明融合了纳米技术与生物技术，带来领域上的突破。纳米颗粒具有较大的比表面积，可连接多个双链DNA分子，使探针具有极高的灵敏度。纳米颗粒上带有多个特异探针，与病毒核酸保守区域互补杂交，因而对病毒具有较高的特异性，且整个检测步骤简洁，过程中使用的溶液等对人体无害，操作方便，使用安全，检测效率高。

主权项

苹果病毒检测方法，其特征在于以巯基标记的DNA作为捕获探针，以荧光基团标记的DNA作为信号探针，二者杂交形成双链DNA，双链DNA探针组装在纳米金颗粒上构建纳米金核酸探针，通过双链取代的方式检测植物病毒并对碱基突变序列进行区分；具体包括以下步骤：(1).以巯基标记的DNA作捕获探针、荧光基团标记的DNA作为信号探针，二者在杂交缓冲液中杂交形成双链DNA溶液；(2).步骤(1)制得的双链DNA溶液与纳米金溶液混合，双链DNA通过Au－S共价键连接至纳米金表面，制得纳米金核酸探针溶液；(3).步骤(2)中制得的纳米金核酸探针溶液与检测缓冲液混合，纳米金的终浓度为1－2nmol/L；(4).将步骤(3)中所得混合液中添加人工合成苹果病毒寡核苷酸或待测苹果样本的RNA提取液，观察荧光现象。