一种高纯度牦牛血清白蛋白的生产工艺

摘要

本发明公开了一种高纯度牦牛血清白蛋白的生产工艺，由以下步骤组成：在牦牛血中加入柠檬酸钠和氯化钠，分离血浆与红细胞，血浆经离心、过滤提取后，放入夹层反应罐内，加热并加入辛酸钠、氯化钠、乙醇或甲醇，缓慢搅拌，分两次加入盐酸调pH值，离心，上清液加沉淀试剂磨成糊状，搅拌，冷藏过夜后离心分离沉淀，沉淀加水溶解，以氢氧化钠溶液调pH后静置，离心分离上清液，过滤和病毒灭活，冻干为成品。本发明制备工艺简单，用料少、工艺流程短，工艺流程操作容易、产品收率高、成本低、产品质量好；生产易实现规模化、自动化控制；使产品具有更高的可靠性与安全性。

主权项

一种高纯度牦牛血清白蛋白的生产工艺，其特征在于，由以下步骤组成：1)取新鲜牦牛血，再加入柠檬酸钠、氯化钠，其中柠檬酸钠与牦牛血的质量体积比为0.43％(w/v)，氯化钠与牦牛血的质量体积比为0.09％(w/v)，然后牦牛血于0～10℃冷库中静置，待血浆与红细胞分层后，用虹吸法吸取血浆，下层血球另用；2)取上述分离血浆，置于具有制冷装置的离心系统中，设定离心系统的温度为2℃～8℃，开启离心机离心，收集血浆，血浆再用0.22μm的微孔滤膜过滤，得精制血浆；3)将精制血浆放入夹层反应罐内，夹层罐加热至65℃～80℃；取辛酸钠、氯化钠加入到与精制血浆等体积的纯化水中溶解，溶解后的溶液加入到精制血浆中，得到混合溶液，其中辛酸钠与混合溶液的质量体积比为0.28～0.43％(w/v)，氯化钠与混合溶液的质量体积比为0.9％(w/v)；再加入乙醇或甲醇溶液，使乙醇或甲醇的体积浓度达到5.0％～10.0％(V/V)，搅拌均匀，加入盐酸调pH值为5.5～6.5，并在温度为65℃～80℃下保温20min～60min后，将溶液加入到搅拌罐中，使溶液降温到室温，再次用盐酸调pH值为3.8～4.5，密封放置；4)取上述溶液，置于离心系统中离心，收集上清液，加入沉淀试剂，使其体积浓度为20％～25％，用胶体磨边加上清液边加沉淀试剂打磨成糊状，搅拌后于2～8℃冷库保存过夜；沉淀试剂采用聚乙二醇6000、聚乙二醇4000或聚乙二醇5000；5)取上述混合溶液，置于离心系统中，设定离心系统的温度为2℃～10℃，离心分离取沉淀物，‑20℃冷库中保存备用；6)根据血浆量称取注射用水，加入到上述沉淀物中，搅拌至完全溶解，用氢氧化钠溶液调节pH值为6.0～7.5，室温放置；置于离心系统中，设定离心系统的温度为8℃～10℃，离心收集上清液；上清液用洁净的0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液备用；7)病毒灭活：设定水浴的温度为60℃，将过滤后的滤液放至水浴中，待滤液的温度达到60℃，保温放置10小时，进行病毒灭活，然后用0.22μm的微孔滤膜过滤，制得病毒灭活滤液，取样检测蛋白质含量；8)冻干，将病毒灭活滤液按冻干曲线冻干，得到成品，冻干曲线为：将病毒灭活滤液迅速冷却至‑45℃，持续1～2小时，升到‑20℃，持续10～20小时，再缓慢升温到0℃，再持续4～8小时升到室温25℃。