一种山羊BLG基因定点敲除修饰系统及应用

摘要

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种山羊BLG基因定点敲除修饰系统及应用。所述定点敲除修饰系统为剪切山羊BLG基因靶序列的转录激活样效应因子核酸酶TALENs；本发明是利用该系统定点敲除山羊BLG基因和敲入人乳铁蛋白(hLF)基因，获得BLG^‑/hLF⁺转基因胎儿成纤维细胞，并应用该细胞作为供核细胞，通过体细胞核移植制备BLG^‑/hLF⁺基因打靶转基因山羊。为定点修饰的转基因哺乳动物制备建立了更为便捷、可靠和经济的技术体系。

主权项

一种山羊BLG基因定点敲除修饰系统，其特征在于所述定点敲除修饰系统为剪切山羊BLG基因靶序列的转录激活样效应因子核酸酶TALENs；所述山羊BLG基因靶序列位于山羊BLG第3外显子(NCBI,emb|Z33881.1|,8 088bp)，转录起始位点下游，其中，3 959‑3 974位核苷酸为左臂识别模块，3 992‑4 008位核苷酸为右臂识别模块，3 975‑3 991位核苷酸为间隔序列spacer；所述的转录激活样效应因子核酸酶TALENs由剪切识别模块TALEN‑3‑L和剪切别模块TALEN‑3‑R组成，所述剪切识别模块TALEN‑3‑L的序列如SEQ ID NO.1所示，所述剪切别模块TALEN‑3‑R的序列如SEQ ID NO.2所示。