| 主权项 |
一种用于产生工程化心肌(EHM)的方法，所述方法包括下述步骤：(i)在一个或多个模具中提供无血清重构混合物，所述重构混合物包含(a)无血清最少必需培养基；(b)无血清补充剂，得到0.5‑50mg/ml白蛋白、1‑100μg/ml转铁蛋白、0.1‑10μg/ml乙醇胺、0.003‑0.3μg/ml亚硒酸钠、0.4‑40μg/ml盐酸左旋肉碱、0.1‑10μg/ml氢化可的松、0.05‑5μl/ml脂肪酸补充剂、0.0001‑0.1μg/ml三碘‑L‑甲状腺原氨酸(T3)和0.2‑2mg/ml胶原蛋白的终浓度；和(c)人心肌细胞和人非肌细胞的混合物，其中总细胞混合物的20％到80％是心肌细胞；其中所述心肌细胞不是使用涉及修改人类生殖系遗传特性或者涉及为工业或商业目的使用人胚胎的过程产生的；其中所述重构混合物的pH为7.2到7.6；(ii)在所述一个或多个模具中培养所述无血清重构混合物，由此使所述无血清重构混合物凝结至少15分钟；(iii)在所述一个或多个模具中，在无血清EHM培养基中培养步骤(ii)中获得的混合物，直至所述混合物凝结到至少50％的其初始厚度，其中所述EHM培养基包含(a)含有0.5‑3mmol/L Ca<sup>2+</sup>的基础培养基；(b)如步骤(i)(b)中定义的无血清补充剂；(c)0.5‑10mmol/LL‑谷氨酰胺；(d)0.01‑1.0mmol/L抗坏血酸；(e)1‑100ng/ml IGF‑1；及(f)1‑10ng/ml TGFβ1；(iv)在如步骤(iii)(a)‑(f)中定义的无血清EHM培养基中，在机械拉伸下培养步骤(iii)中获得的混合物，由此形成生成力的EHM。 |
