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一种转基因大豆食用油荧光定量PCR检测的方法，其特征在于具体步骤为：（1）用CTAB植物基因组DNA快速提取试剂盒提取大豆食用油中的DNA；（2）设计并筛选得到扩增tRNA基因的一对引物，扩增18S基因的一对引物，扩增Lectin基因的一对引物，分别为：tRNA引物：SEQ.ID.NO1SEQ.ID.NO218S引物：SEQ.ID.NO3SEQ.ID.NO4Lec引物：SEQ.ID.NO5SEQ.ID.NO6（3）设计大豆外源基因35S启动子引物、NOS终止子引物，分别为：35S引物：SEQ.ID.NO7SEQ.ID.NO8NOS引物：SEQ.ID.NO9SEQ.ID.NO10；（4）提取非转基因东北大豆的基因组DNA，进行梯度稀释，然后向各稀释液中加入tRNA、18S、Lec引物进行扩增；（5）扩增后，测定各稀释液中相关荧光标记物的Ct值，该Ct值与拷贝数的自然对数呈线性关系，据此绘制tRNA、18S、Lectin基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR标准曲线；（6）对含有带35S启动子和NOS终止子序列质粒的细菌进行梯度稀释，然后向各稀释液中加入35S启动子和NOS终止子引物进行扩增，测定各稀释液中相关荧光标记物的Ct值，并绘制35S启动子和NOS终止子引物的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR标准曲线；（7）向DNA提取液中分别加入tRNA、18S、Lec、35S和NOS引物，进行扩增，每个引物重复3次；扩增后，测定DNA提取液中相关荧光标记物的Ct值，然后根据上述绘制的各基因的定量PCR标准曲线，估计提取液中DNA的含量，从而判断是否从食用油中提取出了可供PCR检测的DNA，各内源基因的损失情况以及样品是否为转基因食用油；所述用CTAB植物基因组DNA快速提取试剂盒提取大豆食用油中DNA的步骤为：对于每种食用油，取两支50ml的试管，每管加入2ml试剂盒中的裂解液PL以及40ml食用油，颠倒混匀， 45℃，250r/min震荡1h， 10000r/min离心5min，去油相，在水相中再加入油相40ml，重复上述操作4次，将两支试管中第4次离心后保留的水相按每管600ul分装到2ml EP管中，每管加入600ul的24:1的氯仿/异戊醇混合液，颠倒充分混匀几分钟，13000rpm离心5min，然后按试剂盒后续操作说明进行；即将320ml食用油中的核酸富集到4ml的CTAB裂解液中，通过试剂盒操作纯化裂解液中的DNA，最后将DNA储存在100ul洗脱缓冲液EB中，存放在2‑8℃。 |
