载脂蛋白AⅠ抗血清的制备方法

摘要

本发明公开了一种载脂蛋白AⅠ（ApoAⅠ）抗血清的制备方法，其技术方案要点是：1)将用于制备ApoAⅠ的血清通过化学试剂处理提纯获得高密度酯蛋白（HDL）；2)将获得的HDL通过盐酸胍和化学试剂处理后经过离心、提纯，获得ApoAⅠ；3)将ApoAⅠ作为抗原，免疫动物，制备ApoAⅠ抗血清，该发明的优势在于1)用化学试剂处理血清制得浓缩的HDL粗品，使后续的超速离心次数和时间大大节省，为大批量提取ApoAⅠ提供了条件；2)用盐酸胍处理代替传统的有机溶剂低温脱脂步骤，方法简便，省时，透析后用凝胶柱层析，收集主峰为高纯度的ApoAⅠ得率提高；3)合理提高抗原剂量免疫动物，通过改变剂量，可缩短抗血清的制备时间，而且免疫的成功率亦比传统方法高。

主权项

一种载脂蛋白AⅠ抗血清的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：1) 高密度脂蛋白的提取：将用于制备载脂蛋白AⅠ的血清通过浓度为6%‑22%的多阴离子化合物和浓度为2‑6mol/L的二价金属离子处理后提纯获得高密度脂蛋白，所述用于制备载脂蛋白AⅠ的血清通过多阴离子化合物和二价金属离子处理后，需再经过浓度为0.3‑1mol/L的草酸钾沉淀除去多阴离子化合物和二价金属离子，获得高密度脂蛋白粗品，所述获得的高密度脂蛋白粗品需依次经过溴化钾进行密度调节，然后用生理盐水透析后，离心，提纯，获得高密度脂蛋白纯品；2) 载脂蛋白AⅠ的提取：将获得的高密度脂蛋白通过浓度为4‑10mol/L盐酸胍处理后经过超速离心、梯度层析，获得载脂蛋白AⅠ；3) 载脂蛋白AⅠ抗血清的制备：将载脂蛋白AⅠ作为抗原，对免疫动物进行免疫反应，制备载脂蛋白AⅠ抗血清，所述作用在免疫动物上的载脂蛋白AⅠ的量为每次8 – 14mg/每只免疫动物，其中选用羊作为免疫动物。