一种提取高纯度藻蓝蛋白的方法

摘要

本发明提供一种提取高纯度藻蓝蛋白的方法，在螺旋藻粉中加入缓冲溶液，搅匀后冻藏、解冻，再进行高压匀质破壁，得到螺旋藻破壁液，经离心分离后取上清液，分别用2µm、0.45µm及0.2µm的微滤膜进行过滤，得藻蓝蛋白粗提取液，过组合型树脂进行脱色纯化，收集洗脱液，即为藻蓝蛋白提取液，再经羟基磷灰石色谱柱进行纯化得藻蓝蛋白精提取液，最后经脱盐及浓缩后进行高速离心喷雾干燥，即得高纯度藻蓝蛋白。通过本发明能最大限度地提取藻蓝蛋白，且产品不会被二次污染，提取螺旋藻中高纯度藻蓝蛋白的提取率为80.0%以上，产品纯度达到A620/A280>4.0。

主权项

一种提取高纯度藻蓝蛋白的方法，其特征在于经过下列各步骤：（1）将新鲜或干燥的钝顶螺旋藻的藻体制成螺旋藻粉；（2）按螺旋藻粉:缓冲溶液 = 1:0.8～1:1.2的质量比，在步骤（1）的螺旋藻粉中加入缓冲溶液，搅匀，于‑10～‑20℃下冻藏12～24h，再在20～25℃下解冻完全后，在压力为40～70MPa下进行高压匀质破壁2～5次，得到螺旋藻破壁液；所述缓冲溶液是pH为6～7、浓度为0.1M的磷酸钾；（3）将步骤（2）所得螺旋藻破壁液经离心分离，取上清液，依次用2µm、0.45µm及0.2µm的微滤膜过滤上清液，得藻蓝蛋白粗提液；所述离心分离是在转速为3500～5000r/min的条件下离心分离20～30min；（4）将步骤（3）的藻蓝蛋白粗提液以5～30mL/min的流速，通过组合型树脂进行脱色纯化，收集洗脱液，即为藻蓝蛋白提取液，组合型树脂的用量是螺旋藻粉体积的0.8～2.0倍；所述组合型树脂为D900型离子交换树脂、HPD‑300L型树脂、BEHP‑3型大网孔非极性吸附树脂、BEHP‑4型大网孔非极性吸附树脂、D112阳树脂中的一种或几种，且几种的组合是任意的；（5）用羟基磷灰石体积的6～8倍量、浓度为0.1mol/L的磷酸盐缓冲溶液，清洗羟基磷灰石色谱柱，再将步骤（4）所得藻蓝蛋白提取液加到羟基磷灰石色谱柱中，静置吸附20～30min后，用羟基磷灰石体积的5～6倍量、浓度为0.03mol/L、流速为2～5mL/min的磷酸盐缓冲溶液进行洗脱，弃去洗脱液，再用羟基磷灰石体积的4～5倍量、浓度为0.03～0.045mol/L的磷酸盐缓冲溶液洗脱羟基磷灰石色谱柱，收集洗脱液，即为藻蓝蛋白精提液；所述磷酸盐缓冲溶液是pH为6.75～6.95、含有0.05～0.15mol/L氯化钠的磷酸盐缓冲溶液；（6）将步骤（5）所得藻蓝蛋白精提液用通透量为30～50KDa的膜进行脱盐及浓缩，得到藻蓝蛋白精提液浓缩物，然后将该浓缩物进行高速离心喷雾干燥，收集粉末，即得到高纯度藻蓝蛋白；所述高速离心喷雾干燥是在加液速度为2～8L/h、进风温度为180～320℃、出风温度为80～90℃、干燥温度为160～220℃的条件下进行的。