重组人促红素聚乙二醇化反应液的光谱检测法及应用

摘要

本发明涉及聚乙二醇化重组人促红素（PEG-EPO）的生产技术领域，尤其涉及一种PEG-EPO反应液的光谱检测法以及多个反应液合并前的快速鉴定方法。检测体系为磷酸盐缓冲液和纳米金溶胶显色剂，以及经稀释的PEG-EPO反应液；测定260nm处的吸光度后将吸光度与稀释倍数进行线性拟合并计算吸光度下降系数（k₂₆₀）。通过比较各反应液的k₂₆₀值可快速判断各反应液的PEG化反应率是否相同或接近。再结合高效液相色谱的检测结果，可快速得出具有相同k₂₆₀值的反应液的PEG化反应率。因此，本发明极大地缩短了PEG-EPO反应液合并前的检测分析时间，提高了PEG-EPO药物生产工艺的效率，节省了人力成本和时间成本。且本发明的检测方法具有很好的灵敏度、可靠性和重现性，可应用于PEG-EPO药物的实际生产工艺过程中。

主权项

一种重组人促红素聚乙二醇化反应液的光谱检测法，其特征在于，包括以下步骤：S1稀释：取n份反应液样品，用水将反应液样品按不同的稀释倍数进行稀释，得到n种不同浓度的稀释液，n≥3；S2配置检测体系：将各稀释液与磷酸盐缓冲液和纳米金溶胶于不同的比色管中混合，并用水定容至刻度得到具有不同浓度的检测液，然后将检测液显色5min以上；所述磷酸盐缓冲液的浓度为10‑60mM，pH为5.0－8.0；所述纳米金溶胶的浓度为1.0×10^‑11－6.0×10^‑9mol/L；所述磷酸盐缓冲液、纳米金溶胶和稀释反应液的体积比为2:1:1；S3、检测：用紫外光谱仪测各检测液在260nm处的吸光度A₂₆₀；S4、数据处理：将各检测液的吸光度A₂₆₀及稀释倍数进行线性拟合，得拟合曲线A₂₆₀＝ax+b，x为稀释倍数；取a的绝对值得吸光度下降系数k₂₆₀。