牡蒿质膜Na+/H+逆向转运蛋白AjSOS1耐盐关键氨基酸位点的筛选方法

摘要

本发明属于基因工程和生物技术领域，公开一种牡蒿质膜Na⁺/H⁺逆向转运蛋白AjSOS1耐盐关键氨基酸位点的筛选方法，提供了SOS1s基因的重组载体、转化细胞、酵母突变体的转化及转化细胞的耐盐性分析。AjSOS1耐盐关键氨基酸位点的筛选：(1)SOS1s基因的克隆；(2)酵母表达载体pAG426GPD‑SOS1s的构建；(3)4个SOS1s酵母转化细胞的耐盐性分析；(4)AjSOS1耐盐关键氨基酸位点的筛选。通过定点突变产生一系列AjSOS1muts并回补酵母突变体ANT3，发现AjSOS1序列中耐盐关键氨基酸位点，为菊花及其近缘种属植物耐盐分子机理的研究提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。

主权项

一种SOS1s基因重组表达载体，其特征在于：该重组表达载体为将SOS1s基因通过双酶切、连接入Gateway入门载体pENTR^TM1A，然后经LR重组反应转入到酵母表达载体pAG426GPD，获得SOS1s基因重组表达载体pAG426GPD‑SOS1s；所述的SOS1s基因为如SEQ ID NO.1所示的AjSOS1基因、如SEQ ID NO.2所示的CrcSOS1基因、如SEQ ID NO.3所示的CcSOS1基因或如SEQ ID NO.4所示的CmSOS1基因。