一种创建兰花发生2n雄配子资源的方法

摘要

本发明涉及植物遗传育种技术领域，具体公开一种创建兰花发生2n雄配子资源的方法。所述方法包括亲本选配、远缘杂交组合、杂种群体构建、2n雄配子的鉴定、发生2n雄配子资源筛选等步骤。本发明利用远缘杂交手段，获得发生2n雄配子的兰花资源，为在没有多倍体的条件下，利用有性杂交方法创建有性多倍体，有效促进兰花多倍体育种，培育突破性的兰花新品种奠定基础。

主权项

一种创建兰花发生2n雄配子资源的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.远缘杂交组合配置：选择适宜亲本，配置杂交组合，在适宜的条件下栽培母本植株，获得果实；S2.杂种群体构建：对果实进行消毒，取其种子进行无菌培养获得中间繁殖体，对中间繁殖体进行植株再生，获得试管苗，试管苗移栽后，栽培至植株开花；S3.2n雄配子的鉴定：待植株开花后，取不同株系植株新鲜成熟花粉，采用直接压片法制片后，在光学显微镜下观察2n花粉，统计2n花粉的发生频率；S4.发生2n雄配子资源筛选：对发生率大于1%的植株进行分株繁殖，并进行两年以上重复鉴定，筛选出发生率高且稳定的株系为兰花发生2n雄配子资源；其中，S1所述杂交组合的杂交方法为：用镊子取出母本当天开花花朵中的花粉块，将父本的花粉块放入母本的蕊腔中，用铅笔在纸牌上写明杂交组合的名称，杂交时间，挂在母本植株上，并将其置于温暖通风的地方，防止寒潮；S2所述杂种群体构建包括如下步骤：S21.果荚的消毒与种子萌发：将刚采收的果实经消毒处理后，用解剖刀切去果荚两端0.5 cm，然后将果实纵向切开取出种子，将种子均匀撒播于种子萌发培养基上，在适宜的温度条件进行暗培养获得中间繁殖体；S22.中间繁殖体的增殖与植株再生：将种子萌发形成的中间繁殖体切块，接种到增殖培养基进行繁殖，经继代培养后转接到分化培养基中进行分化，分化出的芽和苗转入生根壮苗培养基中，进行生根壮苗；S23.试管苗移栽：当小苗长至5～8 cm并具有2条以上根时即可进行炼苗；炼苗时，将培养瓶盖子旋松，放在温室下10～20 d或在室外无直射光的地方放置3～5 d后，取出试管苗移栽；S1所述杂交组合为以金嘴墨兰为母本，以兔耳兰为父本；S21所述种子萌发培养基为1/2 MS培养基+ 0.2～0.5 mg/L 6BA + 0.2～0.5 m g/L NAA +30 g/L蔗糖 +7.5g/L卡拉粉+100ml/L 椰子汁+ 0.5 g/L 活性炭；S22所述增殖培养基为1/2 MS+ 0.5～1.0 mg/L 6BA + 0.2～0.5 mg/L NAA +30g/L蔗糖 +7.5g/L卡拉粉+ 0.5 g/L 活性炭；S22所述分化培养基为1/2MS+ 1.5～2.0 mg/L 6BA + 0.2～0.5 mg/L NAA +30g/L蔗糖+7.5g/L卡拉粉；S22所述生根壮苗培养基为1/2MS+ 0.1～0.2 mg/L 6BA +0.5～1.0 mg/L NAA +20g/L蔗糖 +7.5g/L卡拉粉+ 0.5 g/L活性炭。