一种用全局转录机制工程构建有机溶剂耐受型大肠杆菌的方法

摘要

本发明涉及一种用全局转录机制工程构建有机溶剂耐受型大肠杆菌的方法，属于生物工程技术领域。本发明包括：对全局转录因子σ⁷⁰的编码基因rpoD进行随机突变构建突变文库，转化大肠杆菌进行高通量筛选，获得全局转录因子σ⁷⁰的突变基因rpoD^M1，携带该突变基因rpoD^M1的大肠杆菌E.coli JM109/pHACMC9可耐受69%（v/v）的环己烷。本发明通过对全局转录因子σ⁷⁰进行突变，显著提高了大肠杆菌对环己烷等有机溶剂的耐受性，为提高大肠杆菌等微生物菌株的有机溶剂耐受性提供了方法，为构建耐溶剂性全细胞生物催化剂提供理论依据。

主权项

一种显著改善大肠杆菌有机溶剂耐受性的σ⁷⁰突变基因rpoD^M1，其特征在于：σ⁷⁰突变基因rpoD^M1的编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO: 2；与野生型σ⁷⁰基因rpoD的编码蛋白的氨基酸序列SEQ ID NO: 1相比，其特点为：该σ⁷⁰突变基因rpoD^M1的编码蛋白携带三个突变位点，分别为Asp39Glu，Ala72Val和Thr94Met，其中123位突变产生终止密码子。