一种基于分子反向探针的测序文库构建方法和试剂

摘要

本发明公开了一种基于分子反向探针的测序文库构建方法和试剂，该方法包括：用分子反向探针与变性核酸进行退火杂交，分子反向探针包括5’端的锚定序列和3’端的延伸序列以及二者之间的测序接头序列，锚定序列和延伸序列分别与变性核酸中的目标区域两端的序列反向互补；以目标区域为模板，从3’端的延伸序列开始进行聚合反应，生成目标区域的互补序列；将5’端的锚定序列与目标区域的互补序列连接形成环状核酸分子；使用核酸外切酶消化未环化的线性分子，得到含有目标区域的单链环状分子。将得到的单链环状分子进行测序，从而实现对目标区域捕获测序。本发明的方法实现将单链环状文库构建和目标区域捕获融为一体，从而大大缩减建库流程和周期。

主权项

一种基于分子反向探针的测序文库构建方法，包括如下步骤：使用分子反向探针与变性核酸进行退火杂交，所述分子反向探针包括5’端的锚定序列和3’端的延伸序列以及所述锚定序列与延伸序列之间的测序接头序列，所述锚定序列和延伸序列分别与所述变性核酸中的目标区域两端的序列反向互补；在聚合酶作用下，以所述目标区域为模板，从所述3’端的延伸序列开始进行聚合反应，生成所述目标区域的互补序列；在连接酶作用下，将所述5’端的锚定序列与所述目标区域的互补序列连接形成环状核酸分子；使用核酸外切酶消化未环化的线性分子，得到含有目标区域的单链环状分子。