一种大分子量丝素蛋白冻干粉的制备工艺

摘要

本发明公开了一种大分子量丝素蛋白冻干粉的制备工艺，得到可以快速、完全地溶解于水的丝素蛋白冻干粉，应用于生物医学临床的多个领域。本发明从控制丝素蛋白分子间相互作用力出发，通过改变丝素蛋白溶液的酸碱度、离子强度及浓度，并经过高压高温灭菌诱导丝素蛋白从单分子、多聚体及纳米颗粒等复杂的蛋白结构向50-300纳米左右的稳定纳米颗粒转变，抑制丝素蛋白分子间的相互作用及凝聚交联，因而可以通过基本的冷冻干燥程序得到冻干粉。由于冻干前已经经过高温灭菌，丝素蛋白粉无需进一步的消毒处理就可以直接用于临床治疗，大大简化了操作步骤，节约成本。

主权项

一种大分子量丝素蛋白冻干粉的制备工艺，其特征在于，所述工艺包括以下步骤：S1：蚕丝脱胶：30克蚕丝置于25.44克碳酸钠/12升去离子水中煮沸0.5小时，沸煮过程中要不断搅拌蚕丝使其分散防止粘结在一起，煮完后将脱胶蚕丝捞出并用去离子水清洗，重复清洗3次，脱去丝胶蛋白，留下丝素蛋白，置于超净工作台内干燥过夜；S2：溴化锂溶解：将10克脱胶的丝置于40ml 9.3M溴化锂溶液中，用玻璃棒搅拌使得脱胶丝充分浸透，放于60℃烘箱加热4小时；S3：透析：使用截流分子量为3500‑10000道尔顿的Pierce透析装置或普通透析袋，透析36小时，换水7次，分别在透析开始的3、6、12、18、24、30、36小时换水，可以去除溶液中的溴化锂成分，而丝素蛋白保留在透析袋中；S4：离心：将透析袋中的丝素蛋白溶液移入离心容器中，于4℃、9000转速条件下离心20分钟，弃去沉淀，取上层溶液即是所要制取的丝素蛋白溶液；S5：取一定量的丝素蛋白溶液，在60℃烘干3小时以上，将得到的丝素蛋白膜称重，计算丝素蛋白溶液的浓度(w/v)；S6：高温高压灭菌：用超纯水稀释丝蛋白溶液至浓度6％，然后用酸碱度pH＝7.4，10mM的PB(磷酸盐)缓冲液按体积比1:1与6％丝素蛋白溶液混合均匀，使得混合后的丝蛋白溶液终浓度为3％(w/v)，PB(磷酸盐)缓冲液的终浓度为5mM，将溶液移至玻璃容器中于121℃、0.1MPa,高压灭菌20分钟；S7：冷冻干燥：将以上灭菌后的溶液取10ml置于无菌15ml玻璃瓶中，在‑20℃以下的温度彻底冷冻，之后置于冻干机中抽真空48小时以上使冰升华，得到大分子量丝素蛋白冻干粉。