组培苗蔗糖利用率的测定方法

摘要

本发明公开组培苗蔗糖利用率的测定方法，分别用甜菜蔗糖和甘蔗蔗糖作为有机碳源配制甜菜蔗糖培养基和甘蔗蔗糖培养基，培养长势一致的组培苗至鲜重增重超20倍后，结束培养，测定甜菜蔗糖和甘蔗蔗糖、新生叶片的δ13C值，依据待测植物的组培苗利用甘蔗蔗糖和甜菜蔗糖产生碳同位素分馏值、利用空气二氧化碳的分馏值、组培苗的增重以及蔗糖消耗，计算出组培苗蔗糖利用率。本方法不仅能定量测定组培苗一个生长周期内的自养份额、异养份额等，同时也能计算同期内组培苗的蔗糖利用率，对组培环境因子的调控具有重要的指导价值，为后期组培苗的驯化和移栽提供技术参数。

主权项

组培苗蔗糖利用率的测定方法，其特征在于：包含以下步骤：第一，培养瓶采用完全透气的封口膜封口，分别用C3植物蔗糖和甘蔗蔗糖作为有机碳源配制C3植物蔗糖培养基和C4植物蔗糖培养基；第二，测定上述C3植物蔗糖和C4植物蔗糖的δ¹³C值，C3植物蔗糖的δ¹³C值记为δ_T，C4植物蔗糖的δ¹³C值记为δ_G；第三，选取长势一致的组培苗，记录它们的鲜重M₀，分别接种到C4植物蔗糖培养基和C3植物蔗糖培养基，培养至鲜重增重超20倍后，结束培养；第四，同期，一方面将待测植物的组培苗分别培养在无CO₂的C3植物蔗糖培养基和C4植物蔗糖培养基中；另一方面利用pH为5.5的营养液在待测环境中对长有2片展开叶的待测植物进行溶液培养；第五，分别获取培养前C4植物蔗糖和C3植物蔗糖培养基的蔗糖浓度c₀和体积V₀，培养结束后培养基的C4植物蔗糖和C3植物蔗糖浓度c和体积V，根据蔗糖浓度和体积的变化的计算出蔗糖的消耗第六，测定培养结束后的组培苗鲜重M；计算出组培苗的增重为B＝M‑M₀；第七，获取培养结束后的用C4植物蔗糖培养基和C3植物蔗糖培养基培养的组培苗新生叶片的δ¹³C值δ_G1和δ_T1；第八，获取培养结束后的在无CO₂的C3植物蔗糖培养基和C4植物蔗糖培养基中培养的组培苗新生叶片的δ¹³C值δ_G0和δ_T0；第九，获取培养结束后在溶液培养中的待测植物新生叶片δ¹³C值δ_air；第十，测定培养期间的待测培养环境中空气中的二氧化碳δ¹³C值δ_a；第十一，依据δ_G0和δ_T0以及δ_T和δ_G计算出待测植物的组培苗利用C4植物蔗糖和C3植物蔗糖产生碳同位素分馏值Δ_G和Δ_T；第十二，依据δ_air和δ_a计算出待测植物利用空气二氧化碳的分馏值Δ_air；第十三，将上述所得数据，δ_T、δ_G、Δ_G、Δ_T、Δ_air、δ_G1、δ_T1、δ_air代入方程：$f_b=\frac{{\Delta }_{air}}{{\delta }_G-{\Delta }_G-\frac{\left({\delta }_G-{\delta }_T+{\Delta }_T-{\Delta }_G\right)\left({\delta }_{G1}-{\Delta }_{air}-{\delta }_{air}\right)}{{\delta }_{G1}-{\delta }_{T1}}-{\delta }_{air}},$计算出异养份额f_b；第十四，根据上述计算得到的f_b，结合组培苗的增重B和蔗糖消耗C，计算组培苗蔗糖利用率A。