一种硫酸盐还原菌快速检测方法及其试剂盒

摘要

本发明涉及油田水样检测处理技术领域，特别涉及一种硫酸盐还原菌快速检测方法及检测用试剂盒，本发明的方法首先将待测水样预处理除杂，然后向水样中加入细菌裂解液使水样中的APS菌体充分裂解释放，再加入反应底物，该酶催化反应底物发生氧化还原反应，在反应体系中加入显色底物，酶催化的反应产物与显色底物结合，得到有颜色的反应终产物。根据反应颜色的深浅得到待测水样中SRB的含量。本发明还根据上述检测方法将SRB检测用装置和试剂标准化成试剂盒，以便于各种施工现场的检测。本发明能够有效去除油田水样中杂质干扰，使检测周期大大缩短，并大幅度提高检测的准确性和敏感性。

主权项

一种硫酸盐还原菌快速检测方法， 包括如下步骤:（1）取体积为L的待测水样过滤并结合离心洗涤预处理水样以去除水样中干扰酶活性的杂质，最终将水样浓缩至1.5ml并收集于离心管中；（2）向预处理过的水样中滴入100μl细菌裂解液，使水样中的硫酸盐还原菌充分裂解并释放，所述细菌裂解液包括30 mmol/l Tris‑HCl,2 mmol/lEDTA,100 mmol/l NaCl， 0.1% Triton X‑100, 50 μg/ml 溶菌酶，0.5 μl/ml 苯甲基磺酰氟；（3）分别取体积为150μl硫酸盐还原菌含量已知并且数量级不同的溶液若干份，再取150μl步骤（2）中裂解过的水样，然后分别向所取的多个所述已知含量的硫酸盐还原菌溶液及裂解过的水样中滴入50 μl的反应底物，并混合均匀避光反应3分钟，所述反应底物包括1.5 mmol/L K₃Fe(CN)₆、2.5 mmol/L腺苷‑5′‑磷酸、2.5 mmol/L Na₂SO₃、1.5 mmol/L EDTA、100 mmol/L MES缓冲液；（4）分别向步骤（3）的各溶液中加入50 μl的显色剂，并混合均匀避光反应3分钟，使其充分发生显色反应生成蓝色的亚铁氰化铁反应液，所述显色剂为质量浓度0.5% 的 3，3‑双（4‑羟基苯基）‑1（3H）‑异苯并呋喃酮；（5）将步骤（4）中各已知含量硫酸盐还原菌溶液反应液显色后的颜色作为比对样本，通过颜色对比法或OD值检测对比法确定待测水样的中硫酸盐还原菌含量；（6）再根据步骤（1）中的水样取量换算原待测水样中硫酸盐还原菌含量。