一种磁性固定化酶制备高纯降压肽的方法

摘要

本发明涉及一种磁性固定化酶制备高纯降压肽的方法，属于降压肽制备技术领域。本发明首先利用液体石蜡等物质混合制备的有机相与葡萄糖等物质混合制备的水相以及环氧大豆油混合加热，得磁性固定颗粒混合液，再将其与碱性蛋白酶混合，经振荡吸附，过滤等步骤，制备得磁性固定化酶颗粒，接着将其与海鱼肉浆混合加热酶解，再水浴加热，离心分离，将上层清液蒸发浓缩，干燥即可制备降压肽。本发明提取的降压肽蛋白质含率高达92％以上，且提取率高，达到90％以上；水解度为20～30％，ACE抑制率为高于85％；本发明采用酶解法制备降压肽，制备步骤简单，所需成本低。

主权项

一种磁性固定化酶制备高纯降压肽的方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）按重量份数计，分别称取45～65份液体石蜡、30～40份二氯甲烷和5～15份3‑氨丙基三乙氧基硅烷于烧杯中，对其搅拌混合并置于45～50℃下，水浴加热10～15min，制备得有机相；（2）按重量份数计，分别称量25～45份去离子水、20～30份葡萄糖、30～35份0.8mol/L氢氧化钠溶液和5～10份纳米铁粉颗粒于烧杯中，搅拌混合10～15min，制备得水相，随后再按重量份数计，分别称量35～55份上述制备的有机相、30～40份制备的水相和15～25份环氧大豆油于三口烧瓶中，在65～70℃下水浴加热2～3h，制备得磁性固定颗粒混合液；（3）按质量比1:5，将碱性蛋白酶与上述制备的磁性固定颗粒混合液搅拌混合，待混合10～15min后，将其移至漩涡振荡仪中，在30～50W功率下振荡吸附12～24h后，对其过滤并收集滤饼，用磁铁进行吸附收集磁性颗粒，并用去离子水洗涤3～5次，再在30～35℃下干燥6～8h，制备得磁性固定化酶颗粒，备用；（4）收集海鱼鱼肉，将其置于绞肉机中搅碎制备得海鱼肉糜，随后按质量比1:10，将海鱼肉糜与去离子水搅拌混合制备得鱼肉肉浆，随后用质量浓度10%氢氧化钠溶液调节鱼肉肉浆pH至8.0；（5）待pH调节完成后，按质量比1:10，将步骤（3）制备的磁性固定化酶颗粒添加至鱼肉肉浆中，在25～30℃、0.5～1.0T的平行磁场下水浴加热酶解3～5h，待酶解完成后，将其移至85～90℃下水浴加热10～15min，随后在10000～12000r/min下离心分离15～20min，收集上层清液，并置于45～55℃下旋转蒸发至原体积的1/5，再对其真空冷冻干燥6～8h，即可制备得一种磁性固定化酶高纯降压肽。